一种自发性早产小鼠模型的构建方法

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种自发性早产小鼠模型的构建方法。

背景技术：

1、早产是一种异常的分娩启动，在临床上主要定义为妊娠满28周而不足37周的分娩。早产病因复杂，机制未明，尚无有效的防治手段。大多数(60％)早产是自然发生的，由胎膜早破(25％)或自发性早产(35％)引起。其余40％的早产是由于多胎妊娠、胎儿畸形和子痫前期或绒毛膜羊膜炎等医学适应症而发生的。目前，由于病因未明，尚无有效的模型来模拟自发性早产并进行研究，因而构建自发性早产小鼠模型能够为自发性早产的发生发展以及治疗提供非常好的研究工具，为药物开发提供基础。

2、由于人体实验的医学伦理学制约，动物模型成为研究自发性早产发生发展及探索防治措施的重要工具，然而目前尚未有表型稳定且可供大量繁育的自发性早产动物模型。因此，本领域需要一种自发性早产的动物模型的构建方法。

技术实现思路

1、分娩启动受到免疫系统动态且精确的调节，其中先天性免疫细胞，尤其是髓系细胞在这个过程中发挥着非常重要的作用。胱硫醚β合酶cbs是转硫途径的核心成员，由位于人类第21号(小鼠第17号)染色体上的cbs基因编码；与h2s生成以及dna甲基化密切相关，同时还参与体内氧化还原平衡，转录后修饰以及代谢重编程。我们通过cre-loxp技术特异性敲除小鼠髓系细胞的cbs基因，并验证其敲除，得到cbsf/f/lyz2-cre，并观察其表型，得到自发性早产小鼠模型。

2、本发明首先提供一种自发性早产小鼠模型的构建方法，所述方法包括通过特异性敲除小鼠髓系细胞的cbs基因，构建自发性早产小鼠模型。

3、在一种具体的实施方式中，将loxp序列插入小鼠cbs基因的两端用于标记cbs基因，得到的在cbs基因的两端插入有loxp序列的小鼠命名为loxp-flox-cbs小鼠，或称为cbsf/f小鼠；之后，将cbsf/f小鼠与携带lyz2-cre酶的工具小鼠交配并与cbsf/f小鼠回交纯化，得到所述自发性早产小鼠模型，即cbsf/f/lyz2-cre小鼠；所述lyz2-cre酶是髓系细胞驱动的cre。

4、在一种具体的实施方式中，得到所述自发性早产小鼠模型后，将模型小鼠cbsf/f/lyz2-cre小鼠的雄鼠与对照小鼠cbsf/f小鼠的雌鼠合笼，以繁育更多的模型小鼠和对照小鼠。本发明中，选择模型小鼠cbsf/f/lyz2-cre小鼠的雄鼠与对照小鼠cbsf/f小鼠的雌鼠合笼以繁育更多的模型小鼠和对照小鼠，其子代中有一半是模型小鼠，另一半是对照小鼠；且具体是子代中约有四分之一是模型小鼠cbsf/f/lyz2-cre小鼠的雌鼠，约有四分之一是对照小鼠cbsf/f小鼠的雌鼠。

5、在一种具体的实施方式中，雌雄合笼比例为3:1或以上。

6、在一种具体的实施方式中，所述小鼠为spf级c57bl/6小鼠。

7、本发明还提供一种自发性早产小鼠模型的应用，包括上述构建方法制备得到的自发性早产小鼠模型用于治疗和/或预防动物和人类自发性早产的药物开发。

8、本发明还提供一种筛选用于治疗和/或预防动物和人类自发性早产的药物的方法，包括如下步骤：1)将待测试药物施用于上述构建方法构建得到的小鼠模型中；2)分析待测试药物的治疗效果并进行评价，选择能够明显改善模型小鼠病理特征的测试药物。

9、总的说来，本发明提供一种早产小鼠模型的构建方法，将loxp序列插入小鼠cbs基因的两端用于标记cbs基因，得到的小鼠命名为loxp-flox-cbs小鼠，或称为cbsf/f小鼠。之后，将cbsf/f小鼠与携带lyz2-cre酶的工具小鼠交配并回交纯化，得到所述早产小鼠模型，即cbsf/f/lyz2-cre小鼠。通过检测3周龄小鼠鼠尾或脚趾dna来确定其基因型。进一步，通过采集cbsf/f/lyz2-cre小鼠骨髓巨噬细胞的cbs蛋白及mrna表达水平以验证cbs在骨髓巨噬细胞敲除以及进一步确定小鼠模型构建成功。

10、本发明至少具备如下有益效果：

11、1、本发明通过小鼠模型模拟人类自发性早产的症状及病理过程，能够为疾病研究提供非常好的模型，有效避免人体实验的伦理学纠纷。

12、2、本发明可操作性强，可重复性高，表型观察周期相对人体研究大大缩短，有利于基础研究的开展。

13、3、由于自发性早产病因不明，此前尚无有效的研究模型，发明可以为自发性早产的病因及机制研究，以及预防和治疗提供一定的方向。

14、4、本发明中小鼠模型发生自发性早产的表型明显，可以填补目前缺少相关动物模型的空白，有利于观察并设计相关实验和开发相关药物。

15、5、本发明可以从基因、蛋白质、组织器官等多个方面多个角度对基因敲除进行验证和观察，实验结果真实、可信、有说服力。

1.一种自发性早产小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述方法包括通过特异性敲除小鼠髓系细胞的cbs基因，构建自发性早产小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的自发性早产小鼠模型的构建方法，其特征在于，将loxp序列插入小鼠cbs基因的两端用于标记cbs基因，得到的在cbs基因的两端插入有loxp序列的小鼠命名为loxp-flox-cbs小鼠，或称为cbsf/f小鼠；之后，将cbsf/f小鼠与携带lyz2-cre酶的工具小鼠交配并与cbsf/f小鼠回交纯化，得到所述自发性早产小鼠模型，即cbsf/f/lyz2-cre小鼠；所述lyz2-cre酶是髓系细胞驱动的cre。

3.根据权利要求2所述的自发性早产小鼠模型的构建方法，其特征在于，得到所述自发性早产小鼠模型后，将模型小鼠cbsf/f/lyz2-cre小鼠的雄鼠与对照小鼠cbsf/f小鼠的雌鼠合笼，以繁育更多的模型小鼠和对照小鼠。

4.根据权利要求3所述的自发性早产小鼠模型的构建方法，其特征在于，雌雄合笼比例为3:1或以上。

5.根据权利要求1～4中任意一项所述的自发性早产小鼠模型的构建方法，其特征在于，所述小鼠为spf级c57bl/6小鼠。

6.一种自发性早产小鼠模型的应用，其特征在于，权利要求1～6中任意一项所述构建方法制备得到的自发性早产小鼠模型用于治疗和/或预防动物和人类自发性早产的药物开发。

7.一种筛选用于治疗和/或预防动物和人类自发性早产的药物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：