抗羊白介素6抗体、抗体对及其应用的制作方法

本发明涉及免疫学检测，特别涉及抗羊白介素6抗体、抗体对及其应用。

背景技术：

1、白细胞介素-6(interleukin-6，il-6)，简称白介素6或il6，属于白细胞介素家族成员，是一种功能广泛的多效性细胞炎症因子，主要在纤维母细胞、单核/巨噬细胞、t细胞、b细胞、上皮细胞、角质细胞以及多种肿瘤细胞中产生。il-6可调节多种细胞的生长与分化，能够诱导b细胞分化产生免疫球蛋白、促进t细胞的增殖生长、促进骨髓造血干细胞的增殖和增强血细胞的分化及其抗瘤效应等，具有调节免疫应答、急性期反应及造血功能，并在机体的抗感染免疫反应中方面发挥重要作用。il-6是固有免疫系统对损伤和感染最初反应所表达的重要细胞因子，可促进肝脏产生急性阶段反应物(如crp、pct、c3、saa等等)，是急性感染早期诊断的灵敏指标，其血清浓度水平增高早于pct和crp，可用于早期炎症及早期脓毒症的预警诊断，并有效指导抗生素的合理用药。在发生感染、内外伤、外科手术、应激反应、脑死亡、肿瘤产生以及其它情况的急性炎症反应过程中，il-6的快速产生有助于宿主防御，且il-6升高与疾病的严重程度呈正相关。连续监测患者血清或血浆中il-6的含量，能有效评估系统性炎症反应综合征(sirs)的严重情况以及脓毒血症、脓毒血症性休克的预后情况。另外，在不同炎症疾病中，il-6含量具有显著性差异，如细菌感染所导致的il-6含量增加显著高于非细菌感染。因此，准确检测体内il-6表达水平可为了解病情、评估病情严重程度和判断预后及疗效观察提供可靠数据。

2、羊是传统畜牧业中的六畜之一，是社会生产生活中重要的畜牧品种，对保证生活中肉类供给、增加农牧民收入等具有重要作用。实现羊养殖业的高质量发展，至关重要的一点就是对疾病的预防和质控。il-6表达水平与炎症以及细菌感染等疾病息息相关。在生理状态下，羊血液中il-6表达水平较低，难以被精确定量，因此，提供一种分析灵敏度高的il-6检测方法对于预防和监控畜牧养殖羊疾病具有重要的现实意义和推广应用价值。

3、目前，基于抗原和抗体之间特异性和高灵敏性反应的免疫分析方法具有成本低、选择性强等优势，成为蛋白水平检测的主要研究方向，如胶体金免疫层析、乳胶免疫层析、放射免疫、酶联免疫吸附或化学发光免疫等方法，其关键技术在于开发出特异性识别和结合il-6的抗体。然而，目前缺乏亲和力和特异性高的il-6抗体，导致其灵敏度和检测效率受到了极大限制。

技术实现思路

1、针对现有技术存在抗体亲和力和/或特异性不高导致的免疫检测灵敏度低等问题，本发明提供了2株兔源抗体及其抗体对，对羊il-6蛋白具有高度的识别专一性，而且识别和结合活性好，亲和力高，用于免疫检测羊il-6具有高准确性、高特异性、高灵敏度和良好的稳定性等优点，由此，本发明还提供了前述抗体和抗体对在制备羊白介素6检测试剂或试剂盒中的应用。本发明具体通过以下技术方案实现：

2、本发明第一方面提供了一种抗羊白介素6抗体，选自第一抗体或第二抗体，其中：所述第一抗体轻链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.3-5所示，重链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.8-10所示；所述第二抗体轻链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seq id no.13-15所示，重链可变区上cdr1-3的氨基酸序列分别如seqid no.18-20所示。

3、进一步地，所述第一抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述第二抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq idno.12所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.17所示。

4、进一步地，所述第一抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；所述第二抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.11所示，重链的氨基酸序列如seq id no.16所示。

5、进一步地，所述第一抗体和/或所述第二抗体为全长抗体或为所述全长抗体的抗原结合区域；所述抗原结合区域选自fab、f(ab)2、fab’、f(ab’)2、fv、(fv)2、scfv或sc(fv)2。

6、本发明第二方面提供了一种核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，所述核酸分子编码如上所述的第一抗体或第二抗体。

7、进一步地，所述第一抗体轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.22所示，重链可变区的核苷酸序列如seq id no.24所示；所述第二抗体轻链可变区的核苷酸序列如seq idno.26所示，重链可变区的核苷酸序列如seq id no.28所示。

8、进一步地，所述第一抗体轻链的核苷酸序列如seq id no.21所示，重链的核苷酸序列如seq id no.23所示；所述第二抗体轻链的核苷酸序列如seq id no.25所示，重链的核苷酸序列如seq id no.27所示。

9、本发明第三方面提供了一种抗羊白介素6抗体对，由如上所述的第一抗体和第二抗体组成。

10、本发明第四方面提供了如上所述的抗羊白介素6抗体或抗体对在制备羊白介素6检测试剂或试剂盒中的应用。

11、进一步地，所述检测试剂或试剂盒包括第一抗体和第二抗体，且所述第一抗体作为捕获抗体，修饰有检测标记的所述第二抗体作为检测抗体。

12、与现有技术相比，本发明的优点及积极效果为：

13、1、本发明提供的2株兔源抗体能够特异性识别羊白介素6，对羊白介素6蛋白具有高度的专一性，而且识别和结合活性好，亲和力高，为免疫检测白介素6蛋白的分布或表达水平提供了性能优异的抗体原材料。

14、2、本发明提供的2株抗体识别羊白介素6蛋白表面不同的抗原决定簇，能够用于开发双抗夹心法酶联免疫吸附(elisa)检测体系，为准确、特异、灵敏、高效、稳定检测血清、细胞、组织样本中微量水平的羊il-6蛋白提供了一种可行性和可靠性的方法，具有广阔的市场前景和良好的经济、社会效益。

1.一种抗羊白介素6抗体，其特征在于，选自第一抗体或第二抗体，其中：

2.根据权利要求1所述的抗羊白介素6抗体，其特征在于，所述第一抗体轻链可变区的氨基酸序列如seq id no.2所示，重链可变区的氨基酸序列如seq id no.7所示；

3.根据权利要求2所述的抗羊白介素6抗体，其特征在于，所述第一抗体轻链的氨基酸序列如seq id no.1所示，重链的氨基酸序列如seq id no.6所示；

4.根据权利要求1所述的抗羊白介素6抗体，其特征在于，所述第一抗体和/或所述第二抗体为全长抗体或为所述全长抗体的抗原结合区域；

5.一种核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，其特征在于，所述核酸分子编码如权利要求1-4任一项所述的第一抗体或第二抗体。

6.根据权利要求5所述的核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，其特征在于，所述第一抗体轻链可变区的核苷酸序列如seq id no.22所示，重链可变区的核苷酸序列如seq id no.24所示；

7.根据权利要求6所述的核酸分子、包含所述核酸分子的重组载体或包含所述核酸分子的宿主细胞，其特征在于，所述第一抗体轻链的核苷酸序列如seq id no.21所示，重链的核苷酸序列如seq id no.23所示；

8.一种抗羊白介素6抗体对，其特征在于，由如权利要求1-4任一项所述的第一抗体和第二抗体组成。

9.如权利要求1-4任一项所述的抗羊白介素6抗体或如权利要求8所述的抗羊白介素6抗体对在制备羊白介素6检测试剂或试剂盒中的应用。

10.根据权利要求9所述的抗羊白介素6抗体或抗羊白介素6抗体对在制备羊白介素6检测试剂或试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂或试剂盒包括第一抗体和第二抗体，且所述第一抗体作为捕获抗体，修饰有检测标记的所述第二抗体作为检测抗体。