谷氨酸钠在l-赖氨酸制品中的应用

2025-05-10 10:20:07 484次浏览

（1)方面所述的木聚糖酶、赖氨酸盐、填充剂和粘合剂以及任选的谷氨酸钠。
[0093] 更优选其中，赖氨酸盐是赖氨酸盐酸盐、赖氨酸硫酸盐或者它们的混合物，优选是赖氨酸硫酸盐。
[0094] 更优选其中，填充剂是微晶纤维素和/或糊精。
[0095] 更优选其中，粘合剂是羧甲基纤维素。
[0096] 更优选其中，木聚糖酶氨基酸序列如SEQ ID NO : 2所示。
[0097] 优选其中，赖氨酸盐、填充剂、谷氨酸钠和粘合剂的重量比为40~55 :4~6 :0~2 : 0· 3~0· 8,优选为 42~50 :4. 5~5· 5 :0~1· 5(如 0· 5~1· 5):0. 4~0· 5,更优选为 43~48 :4· 8~5· 2 : 0~1· 2 (如 0· 8~1· 2) :0· 45~0· 55,最优选为 45~46 :5 :0~1 :0· 5。
[0098] 优选其中，包被芯颗粒和包被层的重量比为40~60 :40~60,优选为46~56 :43~53，更优选为48. 5~51. 5 :48. 5~51. 5,最优选为1 :1。
[0099] 优选其中，包被芯颗粒是能通过30目筛并被40目筛截留的颗粒。
[0100] 优选其中，脂肪优选是棕榈脂肪和/或卵磷脂，更优选是能通过商业途径获取的产品，如百佳能、百事美等，优选是百佳能HTL316、百事美T300等。在本发明的具体实施方式中，包被所用的脂肪是百事美T300。
[0101] 优选其中，制备的方法包括： (1) 将赖氨酸盐和填充剂以及任选的谷氨酸钠混合均匀，形成混合物； (2) 向步骤（1)获得的混合物中加入含有木聚糖酶的粘合剂溶液，混合均匀，形成软材； (3 )将步骤（2 )获得的软材过筛(如，30目筛)，形成粗颗粒； (4) 将步骤（3)获得的粗颗粒抛丸，形成圆形微丸； (5) 干燥步骤（4)获得的圆形微丸并进行筛分，形成包被芯颗粒；和， (6 )任选地，将过瘤胃脂肪喷在步骤（5 )获得的包被芯颗粒上。
[0102] 如无相反或者矛盾的指示，以上各方面可以优选本方面或者本文中的其他各方面的内容。
[0103] 本发明具有以下有益效果：通过多个方面的改进，本发明的制品安全可靠，相对于现有技术，可更有效降低动物体内赖氨酸的释放速度，抗降解能力更强，更加提高饲料的利用率而促进动物的生长发育。
[0104] 为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。
[0105] 另外，本发明引用了公开文献，这些文献是为了更清楚地描述本发明，它们的全文内容均纳入本文进行参考，就好像它们的全文已经在本文中重复而明确记载过一样。
[0106]
【具体实施方式】
[0107] 以下通过实施例进一步说明本发明的内容。如未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段和市售的常用仪器、试剂，可参见《分子克隆实验指南(第3版)》（科学出版社)、《微生物学实验(第4版)》（高等教育出版社）以及相应仪器和试剂的厂商说明书等参考。
[0108] 实施例1突变型的木聚糖酶基因的表达构建体的制备根据我们在前中国专利第201210185883号记载的木聚糖酶基因，将其上编码第45位的Arg突变成Ser，即将核苷酸序列第133-135位的CGC突变成TCC，突变型的木聚糖酶的核苷酸序列如序列表的SEQ ID No: 1所示，所编码的木聚糖酶的氨基酸序列如SEQ ID No: 2 所示。然后，根据《分子克隆实验指南》以及所用商品化试剂的操作指南构建分泌表达的酵母，简而言之，即将编码该木聚糖酶的基因用正向引物如序列表的SEQ ID No: 3所示（弓丨入了 EcoR I内切酶位点)、反向引物如序列表的SEQ ID No:4所示（引入了 Not I内切酶位点）扩增后用EcoR I和Not I双酶切，并与经这两个内切酶酶切的pPIC3. 5质粒(可购自 Invitrogen公司）用T4 DNA连接酶进行连接，转化入大肠杆菌DH5a中。挑出阳性克隆，抽提出其中的质粒，经测序验证正确后，将阳性质粒用Sal I酶切线性化后，通过电转化法转化入毕氏酵母GSl 15株，在含G418的平板上挑出阳性酵母转化株，寄回。
[0109] 实施例2突变型的木聚糖酶的发酵制备及活性测定将实施例1获得的阳性酵母转化株接种到50ml BMGY液体培养基（IOOmM磷酸钾缓冲液（pH6. 0)，其中含1%酵母提取物、2%蛋白胨，酵母含氮碱基1. 34%，生物素4*10_5%，葡萄糖 2%，甘油1%)中，于30°C、200rpm培养至0D600达到5. 0。
[0110] 将上述培养物转接到IL BMGY液体培养基中，于30°C、200rpm培养24小时，加入 5ml甲醇，然后继续于30°C、200rpm培养8天，期间每24小时补加5ml甲醇，通气控制溶氧 (DO)大于20%，并控制pH为6.0 (用氨水调节)。培养完成后，用0.22 μ m滤膜过滤并保留上清液，该上清液经SDS-PAGE检测其中富含木聚糖酶对应的蛋白质，由此发酵得到木聚糖酶上清液。
[0111] 取新鲜的上清液，分成三份，一份冷藏待用（A)，一份冷冻干燥至固体后用磷酸钾缓冲液（PH6.0)重新溶解（B)，一份于80°C烘箱中蒸发干燥至固体后用磷酸钾缓冲液 (pH6. 0)重新溶解（C);对照采用中国专利第201210185883号发现的木聚糖酶基因，用磷酸钾缓冲液（PH6. 0)溶解后分成三份，一份冷藏待用（CA)，另两份分别冷冻干燥（CB)和80°C 烘箱蒸发干燥（CC)，然后重溶于磷酸钾缓冲液（pH6. 0)。分别测定这些木聚糖酶活性，换算成原单位体积上清液或单位重量的酶活，计算由于高温脱水造成的酶活损失率，结果如表1 所示，表明相对于原来我们发现的耐高温脱水的木聚糖酶，本发明的突变型的木聚糖酶，虽然耐高温脱水能力略差于原来的，但是仍旧保留了 75%以上的活性，尤其令人意外的是，酶活性有了显著的提升，即便经过高温脱水，其酶活性的绝对值仍旧高于原来的木聚糖酶，甚至高于原来的木聚糖酶在未经过高温脱水时的酶活。
[0112] 表1本发明和市售的木聚糖酶的高温脱水酶活损失率
【主权项】
1. 含L-赖氨酸的制品的制备方法，其包括： (1) 将赖氨酸盐和填充剂以及谷氨酸钠混合均匀，形成混合物； (2) 向步骤（1)获得的混合物中加入任选含有木聚糖酶的粘合剂溶液，混合均匀，形成软材； (3 )将步骤（2 )获得的软材过筛(如，30目筛)，形成粗颗粒； (4) 将步骤（3)获得的粗颗粒抛丸，形成圆形微丸； (5) 干燥步骤（4)获得的圆形微丸并进行筛分，形成包被芯颗粒；和， (6) 将过瘤胃脂肪喷在步骤（5)获得的包被芯颗粒上。
2. 权利要求1所述的方法，其中赖氨酸盐、填充剂、谷氨酸钠和粘合剂的重量比为 42~50 :4. 5~5. 5 :0? 5~1. 5 :0? 4~0. 5,更优选为 43~48 :4. 8~5. 2 :0? 8~1. 2 :0? 45~0. 55,最优选为 45~46 :5 :1 :0? 5。
3. 权利要求1所述的方法，其中包被芯颗粒和包被层的重量比为40~60 :40~60,优选为 46~56 :43~53,更优选为 48. 5~51. 5 :48. 5~5L5,最优选为 1 :1。
4. 权利要求1所述的方法,其中赖氨酸盐是赖氨酸盐酸盐、赖氨酸硫酸盐或者它们的混合物，优选是赖氨酸硫酸盐；填充剂是微晶纤维素和/或糊精；粘合剂是羧甲基纤维素；和/或，木聚糖酶氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。
5. 权利要求1所述的方法，其中包被芯颗粒是能通过30目筛并被40目筛截留的颗粒。
6. 权利要求1所述的方法，其中制品是饲料添加剂。
7. 权利要求1-6之任一所述的方法制备的制品。
8. 谷氨酸钠在制备过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的方法中或者在提高过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的抗降解能力中的应用。
9. 权利要求8所述的应用，其中过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品是权利要求7所述的制品；和/或，制备过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的方法是权利要求1-6之任一所述的方法。
10. 权利要求8所述的应用，其中谷氨酸钠的重量占过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的0. 5~1. 5%，优选是0. 8~1. 2%，最优选是1%。
【专利摘要】本发明提供了谷氨酸钠在制备过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的方法中或者在提高过瘤胃脂肪包被的含L-赖氨酸的制品的抗降解能力中的应用。另外，本发明还提供了相应的含L-赖氨酸的制品及其制备方法。
【IPC分类】A23K1-165, C12N1-19, C12N9-42, A23P1-08, C12N15-63, A23K1-16, C12N15-56
【公开号】CN104543385
【申请号】CN201410777688
【发明人】孟刚, 马吉银, 陈崇安
【申请人】宁夏伊品生物科技股份有限公司
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月17日
【公告号】CN104543385B

文档序号 : 【 8229610 】

技术研发人员：孟刚,马吉银,陈崇安
技术所有人：宁夏伊品生物科技股份有限公司

备注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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