一种鲨鱼鱼肉高f值寡肽的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物工程技术的应用用途，具体涉及一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽的用途。
【背景技术】
[0002] 高F值寡肽混合物是一个由由3~7个氨基酸残氨基酸残基所组成的混合小肽(或 称寡肽)体系。F值(Fischer ratio)是指支链氨基酸(BCAA: Val，lie，Leu)与芳香族氨基酸 (△△六:1'印巧^?1^)含量的摩尔数比值。正常人的血液中？值为3.0-3.5，而患有肝脏疾病病 人的F值只有1.0或者更低，而高F值寡肽的F值应大于20,远高于人体中这两类氨基酸的比 值。由于它具有独特的氨基酸组成和生理功能，已经受到食品和医药界的高度关注。
【发明内容】
[0003] 本发明所要解决的技术问题是提供一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽在抗疲劳方面的用 途。
[0004] 本发明为解决上述技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽的用 途，其特征在于该高F值寡肽安全、无毒副作用、具有显著的抗疲劳活性，对老年人、体弱多 病者和术后病人具有良好的保健作用，可用于制备抗疲劳功能食品或保健食品。
[0005] 该鲨鱼鱼肉高F值寡肽的制备方法为： 1)鲨鱼鱼肉醇溶蛋白的制备:取鲨鱼鱼肉按I g: 15 mL~I g:20 mL固液比加入90%~ 95%的乙醇溶液，用高速组织捣碎机将其制成匀浆，在25~30°C、功率650~700 W超声提取 150 min~180 min;将提取液的pH值用I mol/L NaOH调至9.5~10.0,用蒸馏水将乙醇浓 度调至55%~65%，室温静置45 min~60 min，于8000~10000 rpm离心10 min~15 min;取 上清液，并加入NaCl至浓度为5%~8%，静置8 h~10 h后，于8000~10000 rpm离心10~15 min，收集沉淀，冻干，即得鲨鱼鱼肉醇溶蛋白。
[0006] 2)鲨鱼鱼肉醇溶蛋白的酶解:取鲨鱼鱼肉醇溶蛋白，按固液比I g:5 mL~I g: 10 11^，加入甘氨酸一氢氧化钠缓冲液(0.05111〇1/14!19.5)，用0.1111〇1/1!1(：1或0.1111〇1/1 NaOH调节pH到9.0~1.0，得混合液;将混合物温度调制55~65°C，按照醇溶蛋白质量的0.5 %~1.0%加入碱性蛋白酶(酶活力1.95/10 5)，酶解时间3 11~4 11后，酶解液于90~95°(：保 温10~15min，灭酶活;将酶解液温度调至50~60 °C，按照醇溶蛋白质量的0.6 %~0.8%加 入木瓜蛋白酶，酶解时间4 h~5 h，酶解液降至室温，于8000~10000 rpm离心10~15 min， 取上清液。
[0007] 3 )鲨鱼鱼肉高F值寡肽的酶解:将上述上清液依次经超滤、活性碳吸附纯化和大孔 树脂精制，得鲨鱼鱼肉高F值寡肽。
[0008] 作为优选，所述的步骤1)中的藍鱼为灰星藍(Mustelus griseus)。
[0009] 作为优选，所述步骤3)的超滤、活性碳吸附纯化和大孔树脂精制的具体过程为： 超滤:将上述酶解上清液于0.1~0.15 MPa的工作压力和20~30°C的工作温度下采用 采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液； 活性碳吸附纯化制:将超滤酶解液调pH值至2.5~3.5，按照物料与活性炭颗粒比为10~ 15:1将超滤酶解液以0.3~0.5mL/min流速缓慢加入到活性炭颗粒装载于玻璃柱中，上样 完成后，采用2~3柱体积的1:1比例的lmol/L氨水和无水乙醇混合溶液洗脱色谱柱，收集洗 脱液，干燥，得活性肽精制多肽 大孔树脂精制:将活性碳精制多肽配成10~20 mg/mL的溶液，调pH值至6.5~7.5，缓慢 加入到物料与AB-8大孔树脂比为10~15:1的玻璃柱中，用2~3倍柱体积的双蒸水洗脱除去 杂质，再用2~3柱体积的95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱物，喷雾干燥，即为鲨鱼鱼肉高F 值寡肽。
[0010] 经测定，所得鲨鱼鱼肉高F值寡肽的蛋白含量为95.1~96.4%，氨基酸总量为83.7 ~85.4%，支链氨基酸的含量为16.8~17.1%，芳香族氨基酸的含量为0.43~0.48%，F值为 35.2~39.6,分子量为630~720 Da，支链氨基酸中Val: Ile:Leu为1:1~1.5:3~4,芳香族 氨基酸中 Trp: Tyr: Phe 为 1:1 ~1.2:1 ~1.5。
[0011] 与现有技术相比，本发明提供的一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽的优点在于:本发明工艺 科学合理，操作简单，选用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶作为酶解用酶，酶解过程易监控;利用 的超滤分级、活性炭吸附纯化和大孔树脂精制方法简单，易于产业化应用；同时，本发明所 制备的鲨鱼鱼肉高F值寡肽是鲨鱼鱼肉经酶水解制得，安全、无毒副作用，并且抗疲劳显著， 对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用，鲨鱼鱼肉高F值寡肽可以作为抗疲 劳功能食品进行开发。
【具体实施方式】
[0012] 以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
[0013] 实施例： 一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽及其制备方法和用途，制备工艺流程如下:鲨鱼鱼肉-超声提 取醇溶蛋白-碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解-超滤-活性肽吸附纯化-大孔树脂精制- 鲨鱼鱼肉高F值寡肽。
[0014] 1)鲨鱼鱼肉醇溶蛋白的制备:取灰星鲨鲨鱼鱼肉按I g:18 mL固液比加入95%的乙 醇溶液，用高速组织捣碎机将其制成匀浆，在30 °C、功率680 W超声提取150 min;将提取液 的pH值用I mol/L NaOH调至9.5,用蒸馏水将乙醇浓度调至60%，室温静置50 min，于9000 rpm离心12 min;取上清液，并加入NaCl至浓度为6%，静置9 h后，于9000 rpm离心15 min，收 集沉淀，冻干，即得鲨鱼鱼肉醇溶蛋白。
[0015] 2)鲨鱼鱼肉醇溶蛋白的酶解:取鲨鱼鱼肉醇溶蛋白，按固液比I g:8 mL，加入甘氨 酸一氢氧化钠缓冲液(〇.〇5mol/L，pH 9.5)，用0.1 mol/L HCl或0.1 mol/L NaOH调节pH到 9.5，得混合液;将混合物温度调制60°C，按照醇溶蛋白质量的0.6 %加入碱性蛋白酶(酶活 力1.95 X IO5)，酶解时间3h后，酶解液于95°C保温15min，灭酶活;将酶解液温度调至55 °C， 按照醇溶蛋白质量的0.8%加入木瓜蛋白酶，酶解时间4 h，酶解液降至室温，于9000 rpm离 心12 min，取上清液。
[0016] 3)鲨鱼鱼肉高F值寡肽的酶解:将上述上清液依次经超滤、活性碳吸附纯化和大孔 树脂精制，得鲨鱼鱼肉高F值寡肽。具体过程为： ①超滤:将上述酶解上清液于0.2 MPa的工作压力和25°C的工作温度下采用采用3 kDa 超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液； ② 活性碳吸附纯化制:将超滤酶解液调PH值至2.8，按照物料与活性炭颗粒比为12:1将 超滤酶解液以0.4 mL/min流速缓慢加入到活性炭颗粒装载于玻璃柱中，上样完成后，采用 3柱体积的1:1比例的lmol/L氨水和无水乙醇混合溶液洗脱色谱柱，收集洗脱液，干燥，得活 性肽精制多肽 ③ 大孔树脂精制:将活性碳精制多肽配成15 mg/mL的溶液，调pH值至7.0，缓慢加入到 物料与AB-8大孔树脂比为15:1的玻璃柱中，用2倍柱体积的双蒸水洗脱除去杂质，再用3柱 体积的95%乙醇洗脱，收集95%乙醇洗脱物，喷雾干燥，即为鲨鱼鱼肉高F值寡肽。
[0017]经测定，所得鲨鱼鱼肉高F值寡肽的蛋白含量为96.0%，氨基酸总量为85.1%，支链 氨基酸的含量为17.0%，芳香族氨基酸的含量为0.45%，F值为37.7,分子量为657 Da，支链 氨基酸中 Val: 11e: Leu为1:1.2:3.3，芳香族氨基酸中 Trp: Tyr: Phe为1: 1. 1:1 ~1.3。
[0018] 将制得的鲨鱼鱼肉高F值寡肽做小鼠的抗疲劳活性研究(对小白鼠游泳时间及血 乳酸、肝糖原、血尿素氮等指标的影响），评价其的抗疲劳活性。
[0019] 实验结果表明：制得的鲨鱼鱼肉高F值寡肽能够显著增加小鼠力竭游泳时间，提高 运动耐力，提高小鼠体内的肝糖原含量，降低血乳酸及血尿素氮产生量。。
[0020] 衷1鲨鱼鱼肉高F倌寡肽对小鼠游泳时间的影响（η = 15,平询倌土SD)
注:灌胃体积0.25mL/天，空白对照组每天灌胃同体积的生理盐水。
[0021] 表2鲨鱼鱼肉高F值寡肽对小鼠血乳酸、肝糖原、血尿素氮含量的影响(η = 15,平 均值土 SD)
注:灌胃体积0.25mL/天，空白对照组每天灌胃同体积的生理盐水。
[0022]最后，还需要注意的是，以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然，本发明 不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直 接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
【主权项】
1. 一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽的用途，其特征在于:该高F值寡肽安全、无毒副作用、具有 显著的抗疲劳活性，对老年人、体弱多病者和术后病人具有良好的保健作用，可用于制备抗 疲劳功能食品或保健食品。2. 根据权利要求1所述的一种鲨鱼鱼肉F值寡肽的用途，其特征在于:该高F值寡肽的蛋 白含量为95.1~96.4%，氨基酸总量为83.7~85.4%，支链氨基酸的含量为16.8~17.1%，芳 香族氨基酸的含量为0.43~0.48%，F值为35.2~39.6,分子量为630~720 Da，支链氨基酸 中Val: lie:Leu为1:1 ~1 ·5:3~4,芳香族氨基酸中Trp:Tyr:Phe为1:1 ~1.2:1 ~1.5〇
【专利摘要】本发明公开了一种鲨鱼鱼肉高F值寡肽的用途。本发明以鲨鱼鱼肉为原料，通过超声提取鲨鱼鱼肉醇溶蛋白、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶双酶酶解，利用的超滤分级、活性炭吸附纯化和大孔树脂精制得鲨鱼鱼肉高F值寡肽，该F值为35.2～39.6，分子量为630～720 Da；该高F值寡肽具有显著的抗疲劳效果，可以作为抗疲劳功能食品或保健食品进行开发。
【IPC分类】A23J3/34, A23L33/18
【公开号】CN105707905
【申请号】CN201610098094
【发明人】王斌, 赵玉勤, 孙坤来
【申请人】浙江海洋学院
文档序号 :
【 11024986 】
技术研发人员：王斌,赵玉勤,孙坤来
技术所有人：浙江海洋学院
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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