一种甘薯活性物质及其制备方法与应用
[0088] 细胞增殖抑制率（％) = (1-实验组吸光度值/对照组吸光度值）X100。
[0089] 结果如表2和表3所示。
[0090] 表2甘薯提取物I与甘薯抗癌活性物质对HT-29细胞的增殖抑制作用对比（％ )
[0092] 注：大写字母代表不同浓度对抑制细胞增殖效果差异性，小写字母代表不同物质 对抑制细胞增殖效果差异性。
[0093] 由表2可知：所述甘薯提取物I和甘薯抗癌活性物质对结肠癌细胞HT-29增殖均 具有抑制作用，且甘薯抗癌活性物质对结肠癌细胞HT-29的增殖抑制作用显著高于甘薯提 取物I。甘薯抗癌活性物质浓度为IOOU g ? mL 处理时间48h时，甘薯抗癌活性物质对 HT-29细胞增殖的抑制率为82. 45% ;与甘薯提取物I相比，甘薯抗癌活性物质对细胞增殖 抑制率提高了 44.48%。不同浓度（501^/1111、1001^/1111、2001^/1111、4001^/1111、8001^/ mL和1000 il g/mL)下，甘薯抗癌活性物质对HT-29的抑制增殖作用均显著高于甘薯提取物 I(P < 0? 05) 〇
[0094] 表3甘薯提取物I与甘薯抗癌活性物质对Bcap-37细胞的增殖抑制作用对比 (% )
[0096] 注：大写字母代表不同浓度对抑制细胞增殖效果差异性，小写字母代表不同物质 对抑制细胞增殖效果差异性。
[0097] 由表3可知：所述甘薯提取物I和甘薯抗癌活性物质对乳腺癌细胞Bcap-37增殖 均具有抑制作用，且甘薯抗癌活性物质对乳腺癌细胞Bcap-37的增殖抑制作用显著高于甘 薯提取物I。甘薯抗癌活性物质浓度为IOOU g ^mL 处理时间48h时，甘薯抗癌活性物质对 HT-29细胞增殖的抑制率为65. 54% ;与甘薯提取物I相比，甘薯抗癌活性物质对细胞增殖 抑制率提高了 29. 32%。不同浓度（50ii g/mL、100ii g/mL、200ii g/mL、400ii g/mL、800ii g/ mL和lOOOi! g/mL)下，甘薯抗癌活性物质对Bcap-37的抑制增殖作用均显著高于甘薯提取 物 I (P < 0? 05) 〇
[0098] 实施例14 :采用MTT法测定所述甘薯抗癌活性物质对癌细胞的增殖抑制作用
[0099] 以每孔5X IO4个浓度的细胞（乳腺癌细胞Bcap-37或结肠癌细胞HT-29)接种于 96孔板，用培养基调节每孔为200 ii L，在37°C和5 %的CO2浓度的恒温培养箱中培养24h。形 成的单层细胞用磷酸盐缓冲液（PBS)清洗以除去未贴壁细胞。然后添加不同浓度（50 yg/ mL、100 ii g/mL、200 ii g/mL、400 ii g/mL、800 ii g/mL 和 1000 ii g/mL)的实施例 9 制备的甘薯 抗癌活性物质溶液（溶剂为添加千分之一 DMSO的培养基），继续培养24h、36h和48h。培 养完成后，用100 U L新鲜的培养基更新，每孔加20 ii L的5. Omg/mL的MTT溶液后继续孵育 4h，吸管吸弃孔内培养基，每孔加150 ii L的DMS0,轻微振荡约IOmin使产生的紫色结晶物充 分融解。再用酶标仪于492nm下测定吸光值。甘薯抗癌活性物质对癌细胞的增殖抑制率采 用下列公式进行计算：
[0100] 细胞增殖抑制率（％) = (1-实验组吸光度值/对照组吸光度值）X 100。
[0101] 结果如表4和表5所7JK。
[0102] 表4MTT法测定甘薯抗癌活性物质对HT-29癌细胞增殖的抑制作用（％ )
[0104] 注：大写字母代表不同浓度对抑制细胞增殖效果差异性，小写字母代表不同处理 时间对抑制细胞增殖效果差异性。
[0105] 由表4可知：所述甘薯抗癌活性物质对结肠癌细胞HT-29的增殖抑制作用呈浓度 及时间依赖性，在分别采用不同浓度抗癌活性物质对HT-29细胞进行处理时，随着浓度的 增大，甘薯抗癌活性物质对HT-29的抑制增殖作用均显著增强（P < 0. 05)。对于甘薯抗癌 活性物质而言，随着处理时间的延长，抑制率增大，当以1000 P g ? mL 1处理48h时，抑制率 达到 99. 49%。
[0106] 表5MTT法测定甘薯抗癌活性物质对乳腺癌细胞Bcap-37增殖的抑制作用（％ )
[0108] 注：大写字母代表不同浓度对抑制细胞增殖效果差异性，小写字母代表不同处理 时间对抑制细胞增殖效果差异性。
[0109] 由表5可知：所述甘薯抗癌活性物质对乳腺癌细胞Bcap-37的增殖抑制作用呈浓 度及时间依赖性，在分别采用不同浓度甘薯抗癌活性物质（50-1000U g ? mL 4对Bcap-37 细胞进行处理时，随着浓度的增大，甘薯抗癌活性物质对Bcap-37的抑制增殖作用均显著 增强（P < 〇. 05)。甘薯抗癌活性物质浓度为1000 y g .mL 处理时间48h时，其对Bcap-37 细胞增殖抑制率为95. 20% ;随着处理时间的延长，抑制率增大，处理时间48h时，抑制率达 到最大。
[0110] 实施例15 :结晶紫染色法测定所述甘薯抗癌活性物质对癌细胞的增殖抑制作用
[0111] 用6孔板培养细胞，调节细胞（乳腺癌细胞Bcap-37或结肠癌细胞HT-29)密度为 每孔I X IO6个，细胞培养方法与上述细胞增殖测定所述的方法相同。再加入1.0 mL新鲜配 制的样品（〇. lmg/mL、0. 4mg/mL、lmg/mL实施例9制备的甘薯抗癌活性物质（溶剂为添加千 分之一 DMSO的培养基））和培养基，除空白对照外，其余都含有lOOng/mL佛波酯（PMA)。对 于用甘薯抗癌活性物质处理24h或是对照实验的细胞，抽去培养基，并用冰温的PBS清洗细 胞两次。加入ImL含0.2%的结晶紫（含10%甲醛的磷酸缓冲液）对细胞进行染色，室温 下反应2min。然后将染色液除去，用冰温的PBS清洗细胞两次。粘附在孔上的细胞在显微 镜测定并拍照。
[0112] 结果如图1和图2所示。
[0113] 图1为甘薯抗癌活性物质对HT-29细胞增殖的影响（结晶紫法）。
[0114] 由图1可知，甘薯抗癌活性物质随着浓度增大，染色的活HT-29细胞数量明显减 少，甘薯抗癌活性物质对HT-29细胞的增殖抑制作用呈浓度依赖性；这与MTT的测定结果相 一致。
[0115] 图2为甘薯抗癌活性物质对Bcap-37细胞增殖的影响（结晶紫法）。
[0116] 由图2可知，甘薯抗癌活性物质对Bcap-37的影响也呈现一定的浓度依赖性；这与 MTT的测定结果相一致。
[0117] 实施例16 :甘薯抗癌活性物质抗癌细胞粘附测定
[0118] 将培养好的HT-29和Bcap-37细胞消化后，反复吹打使其分散均匀，用倒置显微镜 计数后，调节细胞浓度。以密度为5 X IO5/孔的细胞悬液密度接入12孔细胞培养板，1.0 mL/ 孔，于37°C、5%的CO2培养箱中培养24h后，吸弃培养基，用PBS清洗。再加入1.0 mL新鲜 配制的样品（0. lmg/mL、0. 4mg/mL、lmg/mL实施例9制备的甘薯抗癌活性物质（溶剂为添加 千分之一 DMSO的培养基））和培养基，除空白对照外，其余都含有lOOng/mL佛波酯（PM)。 于37°C及5%的CO2培养箱中再培养24h，吸弃培养液，用PBS冲洗2次，每孔加入600uL的 胰酶消化3min。然后把12孔板置于室温IOOrpm下摇动，计算癌细胞完全消化下来的时间 (min) 〇
[0119] 结果如表6所示。
[0120] 表6甘薯抗癌活性物质对HT-29和Bcap-37细胞粘附的抑制作用（min)
[0123] 注：大写字母代表不同浓度对抑制细胞增殖效果差异性，小写字母代表对不同细 胞增殖抑制效果差异性。
[0124] 由表6可知：经所述甘薯抗癌活性物质作用HT-29和Bcap-37细胞24h后，HT-29 和Bcap-37细胞完全消化下来的时间均显著小于加入PMA而不加甘薯抗癌活性物质处理的 对照组；随着甘薯抗癌活性物质浓度（IOOug/mL、400iig/mL和1000 iig/mL)的增大，癌细 胞的粘附作用显著减弱（P < 〇. 05);在抗癌活性物质浓度小于400iig/mL时，细胞完全消 化下来的时间仍显著小于对照组（P < 0. 05)。对于HT-29细胞，甘薯抗癌活性物质浓度为 1000 iig/mL时，甘薯抗癌活性物质处理组细胞完全消化下来的时间为5. 35min，与对照组 相比缩短了 55.8% ;对于Bcap-37细胞，甘薯抗癌活性物质浓度为1000 ilg/mL时，甘薯抗 癌活性物质处理组细胞完全消化下来的时间为4. 72min，与对照组相比缩短了 57. 0%。
[0125] 实施例17 :划痕愈合试验测定甘薯抗癌活性物质对癌细胞迁移的影响
文档序号 :
【 9359637 】
技术研发人员：木泰华,赵仕婷,张苗,孙红男,陈井旺
技术所有人：中国农业科学院农产品加工研究所
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
技术研发人员：木泰华,赵仕婷,张苗,孙红男,陈井旺
技术所有人：中国农业科学院农产品加工研究所
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除