一种甘薯活性物质及其制备方法与应用
[0127] 细胞迁移率（％) = (Lq-L24VL 0
[0128] 结果如表7和表8所示。
[0129] 表7甘薯抗癌活性物质对HT-29细胞迁移的抑制作用（％ )
[0130]
[0131]
[0132] 注：小写字母表示不同浓度抑制细胞迁移的差异性。
[0133] 由表7可知：经所述甘薯抗癌活性物质作用的HT-29细胞，细胞的迁移率显著小 于对照组（加入PM而不加甘薯抗癌活性物质）；甘薯抗癌活性物质处理组中，随着浓度 (1001^/1111、4001^/11^和10001^/11^)的增大，癌细胞的迁移率显著降低（？<0.05) ;与 对照组相比，癌细胞迁移率显著降低（P< 0.05)。对于HT-29细胞，对照组细胞迁移率为 34. 19%，而1000 ii g/mL的甘薯抗癌活性物质处理组细胞迁移率为6. 04%，由此表明甘薯 抗癌活性物质可以抑制HT-29癌细胞的迁移。
[0134] 表8甘薯抗癌活性物质对Bcap-37细胞迁移的抑制作用（％ )
[0135]
[0136] 注：小写字母表示不同浓度抑制细胞迁移的差异性。
[0137] 由表8可知：经所述甘薯抗癌活性物质作用的Bcap-37细胞，细胞的迁移率显著 小于对照组（加入PM而不加甘薯抗癌活性物质）；甘薯抗癌活性物质处理组中，随着浓度 (100 ii g/mL、400 ii g/mL和1000 ii g/mL)的增大，癌细胞的迁移率显著减低（P < 0. 05);与 对照组相比，癌细胞迁移率显著降低（P < 0. 05)。对于Bcap-37细胞，对照组细胞迁移率为 54. 19%，而1000 ii g/mL的甘薯抗癌活性物质处理组细胞迁移率为16. 72%，由此表明甘薯 抗癌活性物质可以抑制Bcap-37癌细胞的迁移。
[0138] 实施例18 :MTT法测定所述甘薯抗癌活性物质对癌细胞的增殖抑制作用
[0139] 以每孔5X IO4个的浓度将细胞（乳腺癌细胞Bcap-37或结肠癌细胞HT-29)接 种于96孔板，用培养基调节每孔为200 ii L，在37°C和5 %的CO2浓度的恒温培养箱中培 养24h。形成的单层细胞用磷酸盐缓冲液（PBS)清洗以除去未贴壁细胞。然后分别添加 1000 ii g/mL的实施例10和实施例11制备的甘薯抗癌活性物质溶液（溶剂为添加千分之一 DMSO的培养基），继续培养48h。培养完成后，用100 ii L新鲜的培养基更新，每孔加20 ii L 的5. Omg/mL的MTT溶液后继续孵育4h，吸管吸弃孔内培养基，每孔加150 ii L的DMS0,轻微 振荡约IOmin使产生的紫色结晶物充分融解。再用酶标仪于492nm下测定吸光值。甘薯抗 癌活性物质对癌细胞的增殖抑制率采用下列公式进行计算：
[0140] 细胞增殖抑制率（％) = (1-实验组吸光度值/对照组吸光度值）X 100。
[0141] 结果如表9所示。
[0142] 表9甘薯抗癌活性物质对HT-29和Bcap-37细胞增殖的抑制作用（％ )
[0143]
[0144] 注：小写字母表示不同洗脱梯度得到的甘薯提取物抑制癌细胞的差异性。
[0145] 由表9可知，所述甘薯抗癌活性物质对HT-29和Bcap-37癌细胞处理48小时，对 这两种癌细胞均具有显著地抑制作用。
【主权项】
1. 一种制备甘薯抗癌活性物质的方法，包括下述步骤： 1) 原料预处理：将甘薯洗净、浙干、切片、干燥后粉碎，得甘薯粉； 2) 甘薯粗提物的提取：以氯仿和甲醇的混合溶液为提取剂对所述甘薯粉进行提取，收 集提取液，并除去所述提取液中的提取剂得到甘薯粗提物； 3) 甘薯粗提物的初步分离：对步骤2)中所制得的甘薯粗提物进行固相萃取分离，得到 初步纯化的甘薯粗提物； 所述固相萃取分离的步骤为：将所述甘薯粗提物加入固相萃取柱中，依次以氯仿、丙酮 为洗脱剂进行洗脱，收集丙酮洗脱组分，并除去其中所含的溶剂，得到所述初步纯化的甘薯 粗提物； 4) 甘薯抗癌活性物质的制备：将步骤3)中所得到的初步纯化的甘薯粗提物溶于甲醇 中，得到甲醇溶液，将所述甲醇溶液通过以大孔吸附树脂为吸附剂的层析柱进行吸附层析， 得到甘薯抗癌活性物质； 所述吸附层析中依次采用水、体积分数为20% -40%的乙醇溶液、体积分数为 50 % -60 %的乙醇溶液、体积分数为70 % -80 %的乙醇溶液和体积分数为90 % -95 %的乙醇 溶液对层析柱进行洗脱，收集体积分数为90% -95%的乙醇溶液的洗脱组分，并除去其中 所含的溶剂，得到所述甘薯抗癌活性物质。2. 根据权利要求1中所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述甘薯为徐薯18 ; 所述干燥的方式为热风干燥或冷冻干燥，优选冷冻干燥； 所述冷冻干燥在真空冷冻干燥机中进行；所述冷冻干燥的条件如下：真空度为 50-1OOPa，温度为-60 - -70°C，时间为36-60小时，优选48小时； 所述冷冻干燥前还包括在-20°C--40°C冰箱里预冻24h-36h的步骤； 所述粉碎后所得甘薯粉的粒径为80-100目。3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述提取剂中氯仿 和甲醇的体积比为1:1-3:1 ; 所述提取的方法为浸提法； 所述浸提至少进行一次，优选进行2-5次，最优选进行3次；每次浸提的温度 为-4--20°C，时间为12-48小时，优选24小时；每次提取时，所述甘薯粉与提取剂的配比为 lg: (2_5)mL〇4. 根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，所述固相萃 取分离之前，还包括：将所述甘薯粗提物溶于氯仿和甲醇混合液中，制备甘薯粗提物溶液的 步骤； 所述氯仿和甲醇的混合液中，氯仿和甲醇的体积比为1:1-3:1 ; 所述甘薯粗提物与氯仿和甲醇的混合液的配比为lg: (l_5)mL ; 所述固相萃取柱为反相萃取柱、键合柱或硅胶柱，优选硅胶柱； 每种洗脱剂的用量均为3-5倍柱体积，优选3倍柱体积。5. 根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，所述甲醇溶 液中初步纯化的甘薯粗提物与甲醇的配比为lg =IOmL ; 所述大孔树脂的型号为D4020、DlOl和HP-20,优选D4020 ; 所述吸附层析中，所述水的用量为所述层析柱柱体积的2-5倍； 所述体积分数为20 % -40 %的乙醇溶液、体积分数为50 % -60 %的乙醇溶液、体积分数 为70 % -80 %的乙醇溶液和体积分数为90 % -95 %的乙醇溶液用量均为所述层析柱柱体积 的3-5倍； 所述洗脱的流速为〇. 5-2. OmL/min。6. 权利要求1-5中任一项所述方法制备得到的甘薯抗癌活性物质。7. 权利要求6中所述的甘薯抗癌活性物质在制备下述产品中的应用： 1)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；2)真核生物肿瘤细胞粘附抑制剂；3)真核生物肿瘤 细胞迁移抑制剂；4)预防和/或治疗肿瘤药物。8. 根据权利要求7中所述的应用，其特征在于：所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细 胞为癌细胞；所述癌细胞优选为乳腺癌细胞或结肠癌细胞；所述肿瘤为癌；所述癌优选为 乳腺癌或结肠癌。9. 一种产品，其活性成分为权利要求6中所述的甘薯抗癌活性物质； 其中，所述产品为：1)真核生物肿瘤细胞增殖抑制剂；2)真核生物肿瘤细胞粘附抑制 剂；3)真核生物肿瘤细胞迁移抑制剂；4)预防和/或治疗肿瘤药物。10. 根据权利要求9所述的产品，其特征在于：所述真核生物为哺乳动物；所述肿瘤细 胞为癌细胞；所述癌细胞优选为乳腺癌细胞或结肠癌细胞；所述肿瘤为癌；所述癌优选为 乳腺癌或结肠癌。
【专利摘要】本发明公开了一种甘薯抗癌活性物质及其制备方法与应用。所述甘薯抗癌活性物质的制备方法如下：1)将甘薯洗净、沥干、切片、干燥后粉碎，得甘薯粉；2)以氯仿和甲醇的混合溶液为提取剂对甘薯粉浸提，得甘薯粗提物；3)将甘薯粗提物溶于氯仿和甲醇混合液中，然后对得到的甘薯粗提物溶液进行以氯仿、丙酮为洗脱剂的固相萃取分离，收集丙酮洗脱组分；4)将丙酮洗脱组分通过以大孔吸附树脂为吸附剂的层析柱进行吸附层析，依次采用水、体积分数为20％-40％、50％-60％、70％-80％、90％-95％的乙醇溶液洗脱，收集体积分数为90％-95％的乙醇溶液的洗脱组分，即得。药效试验表明，该甘薯抗癌活性物质对结肠癌细胞、乳腺癌细胞等均具有较强的增殖抑制能力。
【IPC分类】A61P35/00, A61K36/8945
【公开号】CN105079376
【申请号】CN201410189092
【发明人】木泰华, 赵仕婷, 张苗, 孙红男, 陈井旺
【申请人】中国农业科学院农产品加工研究所
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年5月6日
文档序号 :
【 9359637 】
技术研发人员：木泰华,赵仕婷,张苗,孙红男,陈井旺
技术所有人：中国农业科学院农产品加工研究所
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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