异类叶升麻苷衍生物及其制造方法与用图
[0117] 2.将步骤1的混合物以三乙醇胺（Triethanolamine，TEA)中和。接着，将反应混 合物浓缩，并将残余物以硅胶管柱层析用乙酸乙酯（EA)作为冲提液进行纯化，以得到具有 式（IV-2)的结构的化合物3j以及3k。式（IV-2)的结构为：
[0118] 其中化合物3j的R1为氢，R2为氢；以及 ， 化合物3k的R1为氢，R 2为氯。
[0119] 步骤D的反应过程如下：
[0120]
[0121] 步骤E包含以下步骤：
[0122] 1.根据不同的化合物，步骤E的步骤1可分为以下三种条件：
[0123] a.将2mmol的化合物3a~3c、3g、3h、3j以及3k在(TC下分别加至含有2. 2mmol 的二-邻-乙酰基阿魏酸氯化物（di-〇-acetylferulic acid chloride)、二氯甲烧以及 1.5mL的P比啶（pyridine)的溶液中。
[0124] b.将2mmol的化合物3d~3f在0°C下分别加至含有2. 2mmol的二-邻-烯丙基 阿魏酸氯化物（di-〇-allylferulic acid chloride)、二氯甲烧以及1.5mL的R比啶的溶液 中。
[0125] c.将2mmol的化合物3a、3c、3g以及3i在0°C下分别加至含有2. 2mmol的 二-邻-苄基阿魏酸氯化物（di-〇-benzylferulic acid chloride)、二氯甲烧以及1.5mL 的吡啶的溶液中。接着，将混合物于l〇°C下搅拌10小时。将溶剂挥发，并将残余物溶解于 乙酸乙酯中。
[0126] 2.将步骤1的中间产物的有机层依次用水和盐水洗涤，以MgSO4干燥并蒸发。将残 余物以硅胶管柱层析用乙酸乙醋/正己烧混合溶剂（EA:n_hexane = l:l，v/v)进行纯化， 以得到具有式（V-I)的结构的化合物4d~4f、具有式（V-2)的结构的化合物4a~4c、4g 与4h、具有式（V-3)的结构的化合物4i与4m~4〇以及具有式（V-4)的结构的化合物4j 与4k，其中化合物4a的产率为43%。
[0127] 式（V-I)的结构为：
[0128] 其中化合物4d的札为 ， 氢，R2为烯丙氧基；化合物4e的R i为烯丙氧基，R 2为烯丙氧基；以及化合物4f的R i为烯丙 氧基，R2为氢。
[0129] 式（V-2)的结构为：
[0130]
其中化合物4a的札为 氢，R2为氢；化合物4b的R i为氢，R2为氯；化合物4c的R i为甲氧基，R2为甲氧基；化合物 4g的R1为氢，R 2为苄氧基；以及化合物4h的R i为苄氧基，R 2为苄氧基。
[0131] 式（V-3)的结构为：
[0132]
其中化合物4i的R1为苄 氧基，R2为氢；化合物4m的R i为氢，R 2为苄氧基；化合物4n的R i为氢，R 2为氢；以及化合 物4〇的R1为甲氧基，R2为甲氧基。
[0133] 式（V-4)的结构为：
[0134]
其中化合物4 j的札为 氢，R2为氢；以及化合物4k的R i为氢，R 2为氯。
[0135] 步骤E的形成化合物4d~4f的反应过程如下：
[0136]
;形成化合物4a~4c、4g与4h的反应过程如下：
[0137]
;形成化合物4i与4π!~4〇的反应过程如下：
[0138]
;以及形成化合物4j与4k的反应过程如下：
[0139]
O
[0140] 步骤F包含以下步骤：
[0141] 1.分别将化合物4d~4e与氯化亚铜（CuCl)及氯化钯（PdCl2)于甲醇及水的混 合物在室温下强烈搅拌，以得到具有式（VI-I)的结构的化合物5d~5f。式（VI-I)的结构 为：
[0142]
其中化合物5d的1^为 氢，1?2为羟基；化合物5e的R 羟基，R 2为羟基；以及化合物5f的R i为羟基，R 2为氢。
[0143] 操作F的形成化合物5d~5f的反应过程如下：
[0144]
〇
[0145] 步骤G包含以下步骤：
[0146] 1.分别于含有2mmol的化合物4a~4c、4g、4h、4j与4k的二氯甲烷溶液在10°C 下加入40%的含ImL甲胺的甲醇。
[0147] 2.将步骤1的反应混合物搅拌20分钟后，在真空下浓缩。将残余物以硅胶管柱层 析用甲醇/二氯甲烷混合溶剂（1:20, v/v)进行纯化，以得到具有式（VI-I)的结构的化合 物5a~5c、5g与5h以及具有式（VI-2)的结构的化合物5j与5k，其中化合物5a的产率为 90%。化合物5a的R1为氢，R2为氢；化合物5b的R1为氢，R 2为氯；化合物5c的R1为甲氧 基，R2为甲氧基；化合物5g的R1为氢，R2为苄氧基；以及化合物5h的R 1为苄氧基，R2为苄 氧基。式（VI-2)的结构为：
[0148]
其中化合物5j的札为 氢，R2为氢；以及化合物5k的R i为氢，R 2为氯。
[0149] 步骤G的形成化合物5a~5c、5g与5h的反应过程如下：
[0150]
;以及形成化合物5j与5k的反应过程如下：
[0151]
〇
[0152] 以下实验例是利用将下表一所列的样品1~9配制成不同浓度的溶液，进行后续 各种实验。
[0153] 表一
[0154]
[0155] ^iHNMR(CDCI3) δ 7.60 (d，1H，J = 18)，δ 7.43-7. 21 (m，15H)，δ 7.31-7. 25 (m，3H) δ 6· 77 (d，1H，J = 9)，δ 6· 29 (d，1H，J = 18)，δ 5· 16 (d，4H，J = 9)，δ 4· 64-4. 40 (m，1H)，δ 4· 36-4. 11 (m，2Η)，δ 3· 76-3. 35 (m，6Η)，δ 2· 94 (t，2Η，J = 6)。
[0156] MiHNMR(CDCI3) δ 7· 67(d，1Η，J = 16)，δ 7· 45-7. 29(m，3Η)，δ 7· 24(d，1Η，J = 12)，δ 6· 8 (s，1Η)，δ 7· 76 (s，2Η)，δ 6· 53 (d，1Η，J = 16)，δ 4· 45-3. 90 (m，3Η)，δ 3· 90-3. 8 I (m，1Η)，δ 3· 78-3. 74 (m，8Η)，δ 3· 73-3. 70 (m，1Η)，δ 3· 60-2. 86 (m，5Η)。
[0157] ^iHNMR(CDCI3) δ 7· 60(d，1Η，J = 18)，δ 7· 43-6. 84(m，22Η)，δ 6· 29(d，1Η，J = 18)，δ 5· 13 (s，4Η)，δ 4· 97 (s，2Η)，δ 4· 68-4. 63 (m，1Η)，δ 4· 37-4. 06 (m，2Η)，δ 3· 73-3. 36 (m，6Η)，δ 2· 94 (t，2Η，J = 6)。
[0158] ^iHNMR(CDCI3) δ 7.60 (d，1Η，J = 18)，δ 7.43-7. 01 (m，15Η)，δ 7.41-7. 45 (m，3H) δ 6· 87 (d，1Η，J = 9)，δ 6· 29 (d，1Η，J = 18)，δ 5· 16 (d，4Η，J = 9)，δ 4· 64-4. 40 (m，1Η)，δ 4· 36-4. 11 (m，2Η)，δ 3· 76-3. 35 (m，6Η)，δ 2· 94 (t，2Η，J = 6)。
[0159] Sa1HNMR (CDCl3) δ 7· 34-7. 21 (m，7Η)，δ 6· 80-6. 53 (m，3Η)，δ 5· 02 (s，2Η)，δ 4· 38- 4· 05 (m，3H)，δ 3· 73-4. 3· 70 (m，1H)，δ 3· 22-2. 92 (m，3H)，δ 2· 91-2. 62 (m，7H)，δ 2· 62 (t，2 Η, J = 6)
[0160] 首先，分别精称表一的编号样品1~9,以二甲基亚砜（Dimethyl sulfoxide， DMSO)为溶剂配制成浓度为IOmM的储备溶液。储备溶液所包含的样品的分子量、重量以及 溶剂体积示于下表二。
[0161] 表二
[0162]
[0163] 接着，将浓度为IOmM的储备溶液配制成不同样品浓度的溶液。将储备溶液配制为 浓度5 μ M是取0· 5 μ L的储备溶液定量至ImL ;配制为浓度10 μ M是取1 μ L的储备溶液定 量至ImL ;配制为浓度20 μ M是取2 μ L的储备溶液定量至ImL ;配制为浓度50 μ M是取5 μ L 的储备溶液定量至ImL ;配制为浓度100 μ M是取1 μ L的储备溶液定量至0.1 mL ;以及配制 为浓度200 μ M是取2 μ L的储备溶液定量至0.1 mL。
[0164] 实验例一至实验例四是藉由下列三个方向评估本发明的异类叶升麻苷衍生物的 药效，包含：1)是否能降低细胞生成β-类淀粉胜肽（Αβ) ;2)是否能透过促进细胞负责清 除类淀粉胜肽酵素的活性、进而增加其清除类淀粉胜肽的效率；以及3)是否能抑 制Αβ4(ι与Αβ 42的聚集。
[0165] 实验例一、抑制A β 4。累积的试验（I)
[0166] 本实验例分为两阶段：第一阶段使用较低样品浓度做初步筛选；第二阶段则是根 据第一阶段的结果，进一步选取有效的样品，提高样品的试验浓度，在不影响细胞毒性的状 况下，以取得试验样品抑制A β 4(|累积的最佳浓度与最佳效果。
[0167] 实验方法：表现瑞典型突变人类ΑΡΡ695的人类神经瘤母细胞（SH-SY5Y-APP695) 培养于3. 5cm培养皿至细胞浓度达90 %满，于分盘（passage)时在24-孔盘中于每个 孔洞（well)种4x IO5个细胞。隔天将培养液置换为300 yL的化学成分确定的培养基 (chemical-defined medium)，其是 DMEM/F12 培养基，包含 5mM 的 Hepes 缓冲液、0· 6% 的葡 萄糖、3mM 的 NaHC03、2. 5 μ M 的谷氨酰胺（glutamine)、100 μ g/mL 的 transferrin、20nM 的 黄体素（progesterone
文档序号 :
【 9257319 】
技术研发人员：苏慕寰,林汉钦,胡明宽,李易达,王昭日
技术所有人：杏辉天力(杭州)药业有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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