绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试剂盒及其实现方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及的是一种生物基因领域的技术，具体是一种检测绿壳蛋鸡啄羽基因 rsl3640917C/T的试剂盒及其实现方法。
【背景技术】
[0002] 琢羽（feather pecking，FP)是蛋鸡饲养中尤其是高密度大群饲养中常见的问题。 在禽类饲养业中，啄羽导致鸡群的死亡率上升、饲料消耗增加以及动物福利下降，鸡群一旦 部分出现啄羽现象就很容易蔓延到整个鸡群，形成啄羽癖，给禽类饲养业带来了巨大的经 济损失。鸡群严重的啄羽行为可造成鸡只羽毛覆盖减少，羽毛损伤掉落的鸡，热量散失加 快，为了维持正常的体温，采食量增加，比正常时增加27%~30% (Tauson，R.，Cages:how could they be improved，in The laying hen and its environment. 1980? Springer, p. 269 - 304.)，更严重的可导致鸡只疼痛，使整个鸡群采食量下降、饲料转化率降低，导致 50%以上的死亡率，对蛋鸡饲养者的经济效益影响巨大。温和型啄羽也会对蛋重产生显著 影响（Buitenhuis，A.，et al. ,Genetic and phenotypic correlations between feather pecking behavior, stress response， immune response， and egg quality traits in laying hens. Poultry science，2004. 83 (7) :p. 1077 - 1082)，还会影响国内淘汰蛋鸡的价 格，减少收入。
[0003] 长期以来国内外大都使用断喙的方式减少鸡只啄羽，即在鸡只7 - 10日龄（热刀 断喙）或0日龄（红外断喙）使用机器将喙的前部1/3或1/2处去除，但是无论哪种断喙 方式都会使鸡只产生应激。随着人们对动物福利问题日益关注，断喙这种会对鸡造成应激 的行为受到更大的质疑，有些国家和地区已经开始尝试禁止断喙。所以，从长远来看，随着 分子手段在家禽中的深入应用，对蛋鸡的啄羽行为，应该注重通过分子辅助遗传育种手段 生产出低啄羽行为的蛋鸡品系来加以控制。
[0004] 根据Van der Poel等（2010)研宄发现，四号染色体上的HTR2C基因上的一个SNP 与鸡琢羽行为有直接遗传相关，并且相关极显著（Van der Poel，et al.，Across - line SNP association study for direct and associative effects on feather damage in laying hens. Behavior genetics，2010. 40(5) :p. 715 - 727·)。随着分子生物学技术和鸡 基因组研宄的飞快发展，育种更准确、进展更快的分子育种已经提上历史舞台，从分子生物 学角度研宄鸡啄羽行为的机理，并研宄候选基因和分子遗传标记，运用标记辅助选择的方 法可以快速、高效的达到育种的目的。
【发明内容】
[0005] 本发明针对现有技术存在的上述不足，提出一种绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试 剂盒及其实现方法，能够快速确定待测鸡只为野生型纯合体、突变型纯合体还是杂合体。
[0006] 本发明是通过以下技术方案实现的：
[0007] 本发明涉及一种绿壳蛋鸡啄羽相关基因检测用试剂盒，包括：
[0008] 1)用于PCR扩增以检测rsl3640917基因用的引物对，即上游引物U和下游引物 D，其中：
[0009] U 如 Seq ID No. 1 所示，即：5' - CACAATGACCACGACAACG - 3' ；
[0010] D 如 Seq ID No. 2 所示，即：5' - ATCTCACGGAACCCAAATG - 3' ；
[0011] 2)限制性核酸内切酶Acul，其序列为：
[0012] 5' - CTGAAG(N) 16 I - 3' 以及 3' - GACTTC(N) 14 t - 5'
[0013] 其中箭头所指位置为酶切位点，N表示任何碱基。
[0014] 本发明涉及上述试剂盒的实现方法，对待测鸡只的包括rsl3640917C/T突变在内 的基因组DNA为模板，采用所述引物进行PCR扩增，再用限制性核酸内切酶AcuI酶切所得 的PCR扩增产物，电泳检测所得到的酶切产物并判断待测鸡只的rsl3640917位的脱氧核糖 核苷酸是野生型C或突变型T。
[0015] 所述的判断具体为：当电泳显示为两条带，即酶切产物为106bp和295bp两个片 段，表示所述待测鸡只的基因型为CC，是野生型纯合体；当电泳显示为一条带，即酶切产物 为401bp -个片段，表示所述待测鸡只的基因型为TT，是突变型纯合体；当电泳显示为三条 带，即酶切产物为l〇6bp、295bp及401bp三个片段，所述待测鸡只的基因型为CT，是杂合体。
[0016] 所述的野生型纯合体CC啄羽行为更为严重；突变型纯合体TT不易产生啄羽行为。 技术效果
[0017] 利用本发明提供试剂盒及其实现方法检测鸡只是否携带易产生啄羽行为的等位 基因，可以确定鸡只啄羽行为，提前对鸡只进行相应的饲养管理，减少啄羽造成的经济损 失。本发明为蛋鸡育种工作中针对啄羽行为开展标记辅助选择，提供了一个分子遗传标记 检测方法，使用该方法和遗传标记对蛋鸡的啄羽行为进行标记辅助选择，可大大降低分子 育种的花费，为加速改善蛋鸡啄羽现象的分子育种奠定了基础。本发明提供的方法或试剂 盒操作简单，只需将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳，可确定待测鸡只的rsl3640917脱氧核 糖核苷酸是野生型C还是突变型T。准确度高，没有杂带；耗时短，2 - 3小时；费用低廉；可 实现自动化检测。为鸡的育种工作提供便利，将在鸡的育种中发挥巨大作用。
【附图说明】
[0018] 图1为酶切产物的琼脂糖凝胶电泳图。
【具体实施方式】
[0019] 下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行 实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施 例。 实施例1
[0020] 本实施例提供了具体的检测绿壳蛋鸡啄羽行为的方法：PCR扩增包括rs 13640917 脱氧核糖核苷酸在内的片段，用限制性核酸内切酶AcuI酶切所得的PCR扩增产物，电泳检 测酶切产物，按照如下方法确定待测鸡只的rsl3640917脱氧核糖核苷酸是野生型C还是 突变型T，从而确定待测鸡只的啄羽性状：当电泳显示为两条带，所述待测鸡只的基因型为 CC，是野生型纯合体，容易产生啄羽行为；当电泳显示为一条带，所述待测鸡只的基因型为 TT，是突变型纯合体，不易产生啄羽行为；当电泳显示为三条带，所述待测鸡只的基因型为 CT，是杂合体。
[0021] 进行所述PCR扩增的一对引物中，一个引物的核苷酸序列具体为Seq ID No. 1，另 一个引物的核苷酸序列具体为Seq ID No. 2。
[0022] 所述PCR扩增的模板具体为所述待测鸡只的基因组DNA。
[0023] 以上述待测鸡只的基因组DNA作为模板应用上述引物对进行PCR扩增后，用限制 性核酸内切酶AcuI酶切所得的PCR扩增产物，电泳检测酶切产物，可按照如下方法确定待 测鸡只的rsl3640917脱氧核糖核苷酸是野生型C还是突变型T，从而确定待测鸡只的啄羽 性状：如酶切产物为l〇6bp和295bp两个片段，所述待测鸡只的基因型为CC，是野生型纯合 体，容易产生啄羽行为，羽毛覆盖较差；如酶切产物为401bp -个片段，所述待测鸡只的基 因型为TT，是突变型纯合体，不易产生啄羽，羽毛覆盖较好；如酶切产物为106bp、295bp及 401bp三个片段，所述待测鸡只的基因型为CT，是杂合体。
[0024] 下列实施例中所用方法如无特殊说明均为常规方法，所用原料都可从商业途径获 得。引物合成及测序工作均由上海生工生物有限公司完成。
[0025] 本实施例具体包括以下步骤：
[0026
文档序号 :
【 9258175 】
技术研发人员：姚俊峰,王晓亮,杨长锁,王敏
技术所有人：上海市农业科学院
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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