生物材料性能的保存和储存方法
[0034] 在某些实施方式中，将生物材料置于包含至少一种降低或防止生物材料胞外基质 完整性损失的试剂和至少一种或多种促进细胞活力保留的试剂的溶液。
[0035] 在将生物材料置于上述任一种溶液中后，随后可储存该生物材料。例如，在将生 物材料置于包含至少一种试剂的溶液中后，可在多种温度下储存该混合物以进一步促进生 物材料胞外基质的保存并进一步防止或降低生物材料活力的损失。例如，这些温度可包括 但不限于低温温度和常温温度。在将生物材料储存于低温温度中时，优选减少或防止冰 核。在某些方面中，低温温度可包括以下温度范围：_25°C至+35°C、_15°C至+30°C、_5°C至 +25°C、-5°C 至+20°C、-5°C 至 +15°C、-5°C 至+10°C、-5°C 至+5°C、0°C 至 +10°C、0°C 至+9°C、 0°C 至+8°C、0°C 至+7°C、0°C 至+6°C、0°C 至+5°C、0°C 至+5°C、0°C 至+4°C、0°C 至+3°C、0°C 至 +2°〇、+1°〇至+8°〇、+1°〇至+6°〇、+1°〇至+4°〇、+1°〇至+3°〇、+2°〇至+9°〇、+2°〇至+6°〇、+2°〇 至 +4°C、+3°C 至 +8°C、+3°C 至 +6°C、+3°C 至 +5°C、+4°C 至 +8°C、+4°C 至 +6°C、+5°C 至 +9°C、 +5°C至+7°C、+6°C至+10°C、+6°C至+8°C、+7°C至+9°C和 +8°C至+10°C。在某些方面中并 取决于生物材料，优选低温温度。例如，如果软骨细胞和/或软骨是生物材料，可使用上文 所述低温温度保存软骨细胞和/或软骨。例如，如果软骨细胞和/或软骨是生物材料，低温 温度的范围优选-25°C至+35°C，更优选-5°C至+25°C，且最优选(TC至+10°C。在某些方面 中，可将生物材料储存数小时、数天、数月或数年。例如，优选将软骨细胞和/或软骨（如软 骨组织塞）储存数小时至最多三个月、数小时至最多两个月、数小时至最多一个月，等。
[0036] 在某些方面中，可以多种所需时间间隔替换储存的生物材料的不含动物产品的溶 液。例如，可在生物材料储存期间并直至从储存中取出储存的生物材料以用于进一步使用 前，每周两次、每周一次、每两周一次、每月一次、每两月一次替换不含动物产品的溶液。
[0037] 在使用上文所述方法和组合物时，在某些方面中，该生物材料包括软骨细胞和/ 或软骨。本发明的一个目的包括在储存期间降低或防止生物材料的胞外基质材料性能损失 并优化生物材料的细胞活力，用于以后的应用。在该方面中，将软骨细胞和/或软骨置于包 含至少一种试剂的溶液中，所述试剂至少降低或防止胞外基质完整性的损失。可将软骨细 胞和/或软骨置于胞外型溶液中，该胞外型溶液包含上文所述浓度的MMP抑制剂，且随后可 将该混合物在范围为-25°C至+30°C的低温温度下储存一段时间。在另一个方面中，可将软 骨细胞和/或软骨置于胞内型溶液中，该胞内型溶液包含上文所述浓度的MMP抑制剂，且在 某些方面中，该胞内型溶液任选地还包含上文所述营养混合物以促进细胞活力的保留。随 后将置于胞内型溶液中的软骨细胞和/或软骨在范围为_25°C至+25°C的低温温度下储存 一段时间。
[0038] 在一个方面中，需要确定最能够降低或防止储存期间生物材料性能（例如胞外基 质完整性，包括胞外基质渗透性、水含量、细胞活力等）损失的溶液。在进一步确定最能够 降低或防止生物材料性能损失的方法和组合物的同时，可将相同的生物材料置于上文所述 两种不同的溶液（即胞内型和胞外型）中。这两种溶液都含有减少或防止生物材料胞外基 质性能损失的试剂，且该胞内型溶液可任选地含有营养混合物。在将相同的生物材料置于 两种不同溶液中后，可以类似方式（即在相同温度下，储存相同时间等）储存两种不同溶液 中的生物材料。一段时间后，将置于两种不同溶液中的相同生物材料从储存中取出并测试 生物材料性能（如细胞活力、胞外基质渗透性等）并对其进行比较以确定最能够降低或防 止生物材料活力损失的方法和组合物。在某些方面中，这些方法和技术可适用于软骨细胞 和/或软骨以进一步确定最能够在储存期间降低或防止生物材料完整性损失的溶液。
[0039] 在一些实施方式中，本发明涉及一种组合物，其包含置于溶液中的生物材料，所述 溶液包含至少一种降低或防止生物材料性能损失的试剂。该生物材料性能可包括胞外基质 完整性、细胞活力或其组合。胞外基质完整性可包括例如胞外基质渗透性、胞外基质水含 量、胞外膜糖胺聚糖含量或其任意组合。该生物材料可包括真核组织。在一些实施方式中， 该生物材料可包括软骨。在一些实施方式中，该生物材料可包括胞外基质中的软骨细胞。在 一些实施方式中，该生物材料可包括含有活细胞的同种异体移植物材料。在一些实施方式 中，该生物材料可包括含有活细胞和胞外基质的同种异体移植物材料，且该试剂降低或防 止胞外基质完整性、细胞活力或其组合的损失。在这类实施方式中，该同种异体移植物材料 可以是软骨。在一些实施方式中，该溶液可以是不含动物产品的溶液，如不包含胎牛血清的 溶液。在一些实施方式中，该溶液可以是胞外型溶液，如等渗胞外型溶液。在一些实施方式 中，该溶液可以是胞内型溶液，如等渗胞内型溶液。
[0040] 在一些实施方式中，该至少一种降低或防止生物材料性能损失的试剂在溶液中的 浓度范围是IOOpM至ImM。在一些实施方式中，该至少一种试剂是酶抑制剂，如最小化酶活 性以降低或防止生物材料性能损失的酶抑制剂，该生物材料性能包括胞外基质完整性。例 如，该酶抑制剂可以抑制至少一种基质金属蛋白酶，如一种或多种以下物质：MMP 1、MMP2、 MMP3、MMP7、MMP8、MMP9、MMP10、MMP11、MMP12、MMP13、MMP14、MMP15、MMP16、MMP17、MMP 19、 MMP 20、MMP 21、MMP 23A、MMP23B、MMP24、MMP25、MMP26、MMP27、MMP28 或其任意组合。在 一些实施方式中，该酶抑制剂在溶液中的浓度范围是1.0 nM至1000 μ Μ。在一些实施方式 中，该酶抑制剂可选自：多西环素、??ΜΡ、上调内源性??ΜΡ的化合物、PCK3145、ΒΒ-2516和 ΒΒ-94。
[0041] 在一些实施方式中，本发明涉及一种组合物，其包含置于溶液中的生物材料，该溶 液包含至少一种降低或防止生物材料性能损失的试剂，其中该溶液是不含动物产品的溶 液，包括等渗的胞外型溶液，该生物材料包括软骨或胞外基质中的软骨细胞，且该至少一种 试剂包括浓度为1.0 nM至ImM的基质金属蛋白酶的酶抑制剂。在一些实施方式中，本发明 涉及一种组合物，其包含置于溶液中的至少一种降低或防止生物材料性能损失的试剂，该 溶液是不含动物产品的溶液，包括等渗的胞内型溶液，该生物材料包括软骨或胞外基质中 的软骨细胞，且该至少一种试剂包括浓度为1.0 nM至ImM的基质金属蛋白酶的酶抑制剂。
[0042] 在一些实施方式中，本发明涉及一种储存生物材料的方法，该方法包括将生物材 料置于溶液中，所述溶液包含至少一种降低或防止生物材料性能损失的试剂。在一些实施 方式中，该生物材料可包含天然或工程改造的真核组织。在一些实施方式中，该生物材料可 包括软骨。在一些实施方式中，该生物材料包括胞外基质中的软骨细胞。在一些实施方式 中，该生物材料包括含有活细胞的同种异体移植物材料。在一些实施方式中，该生物材料包 括含有活细胞和完整胞外基质的同种异体移植物材料。在一些实施方式中，该同种异体移 植物材料可以是软骨。在一些实施方式中，该溶液可以是不含动物产品的溶液。在一些实 施方式中，该溶液可以是胞外型溶液，如等渗的胞外型溶液。在一些实施方式中，该溶液可 以是胞内型溶液，如等渗的胞内型溶液。在一些实施方式中，该溶液不包含胎牛血清。在一 些实施方式中，该至少
文档序号 :
【 8515135 】
技术研发人员：K·G·M·布鲁克班克
技术所有人：生命线科学有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
技术研发人员：K·G·M·布鲁克班克
技术所有人：生命线科学有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除