一种利用神经毒素诱导大鼠孤独症模型的制备方法与流程

本发明属于动物模型构建，具体涉及一种利用神经毒素诱导大鼠孤独症模型的制备方法。

背景技术：

1、孤独症也称自闭症，是一类多发于青少年的发育性神经精神疾病，患者多会表现出社交障碍、重复性刻板动作和焦虑等行为及情绪的异常，也是一种广泛性发育障碍，主要病因包括遗传和环境因素，研究表明孤独症与遗传因素具有高度的相关性，此外，包括脑结构和功能异常、生物学机制以及母孕期不利因素等也会影响孤独症的发病。产前和新生儿期暴露于化学物质可导致中枢神经系统发育异常。

2、近年来，世界各国孤独症的患病率逐年升高，孤独症的基础与临床研究以及孤独症动物模型的研究已成为前医学与神经科学领域的热点之一。目前在国际范围内，孤独症已不仅仅是一个医学问题，更是逐渐成为医学背景下的急需解决的社会问题。因此，提高对本病的认知和研究水平变得尤为重要。动物模型因其可控性、易得性及预知性等特点，提供了优于人体研究的优势，在人们对疾病病因及发病机制的探索中扮演着重要角色，孤独症动物模型成为人们探索神经系统与孤独症发病关系的关键。

3、目前围绕孤独症病因及发病机制而创制的动物模型不断增多，这一方面显示出学术界对本病的不断重视，同时模型的多样化也造成了研究上的莫衷一是。纵观国际及国内对动物模型的评价标准，三种有效性广泛用于评估模型与人类疾病的接近程度。模型呈现的有效性越多，其对人类疾病的呈现效果就越好。这些有效性不仅在评估动物模型的可靠性上至关重要，其在评估药物治疗的疗效时也不可替代。在2008年的神经毒理学会议上，各国的临床医师和基础研究科学家共同出席了一个关于孤独症的专题研讨会，共同探讨孤独症的行为特征及基于这些特征如何使用神经毒理学建立一种啃齿类或灵长类动物的孤独症模型，目前常见孤独症模型制备方法有神经毒理学模型和遗传基因学模型两大类。

4、目前认为孤独症谱系障碍是环境与遗传因素共同作用所致。流行病学研究表明，胎儿暴露于某些具有神经毒性的药物，如丙戊酸(valproic acid，vpa)和丙酸等抗癫痫药物，可导致其神经系统发育障碍，严重影响认知功能发展，导致孤独症的产生，因此，神经毒理学方法是建立和研究孤独症动物模型的重要手段之一。孕期vpa暴露是一种经典而常用的神经毒理学孤独症模型，孕12.5d的小鼠腹腔注射vpa后，其子代均可出现社交性和探索性行为减少、重复刻板运动、焦虑紧张状态等孤独症谱系障碍样表现。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种利用神经毒素诱导大鼠孤独症模型的制备方法，建立的孤独症模型可以再现bmaa的母婴传递过程，也可以模拟新生儿出生后接触到环境中的bmaa毒素，导致疾病发生的过程；制备过程相对简单，不需要很多试剂及设备仪器支持即可完成，操作过程简便易操作，出现异常情况较少。

2、本发明提供了β-n-甲氨基-l-丙氨酸在制备孤独症动物模型中的应用。

3、本发明还提供了一种利用神经毒素诱导大鼠幼鼠孤独症模型的制备方法，包括向大鼠雌鼠注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸后与大鼠雄鼠合笼，产下的幼鼠为大鼠幼鼠孤独症模型；

4、或向正常出生后的大鼠幼鼠注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸，得大鼠幼鼠孤独症模型。

5、优选的，所述注射包括注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸的pbs溶液。

6、优选的，包括向大鼠雌鼠体内注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸1～1000mg/kg体重大鼠；

7、向幼鼠体内注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸1～200mg/kg体重大鼠。

8、优选的，所述注射的方法包括皮下注射。

9、优选的，所述皮下注射的次数为1次。

10、优选的，在得到所述大鼠幼鼠孤独症模型后，还包括利用旷场实验进行验证。

11、优选的，通过雌鼠注射的方法得到的大鼠幼鼠孤独症模型，在幼鼠出生3～6周后进行所述旷场实验，判断幼鼠是否有孤独症行为。

12、优选的，通过幼鼠注射的方法得到的大鼠幼鼠孤独症模型，在注射1～2周后进行所述旷场实验，判断幼鼠是否有孤独症行为。

13、优选的，所述大鼠包括wistar大鼠、sd大鼠、f344大鼠、lewis大鼠、shr大鼠或wky大鼠。

14、有益效果：本发明提供了一种利用神经毒素诱导大鼠幼鼠孤独症模型的制备方法，可通过两种途径制备得到：雌鼠注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸(β-n-methylamino-l-alanine，bmaa)后与雄鼠合笼，产下的后代为大鼠幼鼠孤独症模型；向正常出生的幼鼠注射bmaa，得大鼠幼鼠孤独症模型。

15、本发明利用神经毒素bmaa建立孤独症模型，更有利于后续孤独症诊断及治疗的研究，具有与之前的动物模型所不具备的优点。本发明实施例中将产前母鼠进行不同剂量bmaa给药处理，并对给药前后母鼠及给药母鼠产下的幼鼠进行血液中毒素含量检测，可得到bmaa在母鼠体内代谢积累情况和通过母婴传递，在幼鼠体内毒素积累结果。本发明建立孤独症模型可以再现bmaa的母婴传递过程，也可以模拟新生儿出生后接触到环境中的bmaa毒素，导致疾病发生的过程。本发明所述动物模型的构建方法，制备过程相对简单，不需要很多试剂及设备仪器支持即可完成，操作过程简便易操作，出现异常情况较少。

1.β-n-甲氨基-l-丙氨酸在制备孤独症动物模型中的应用。

2.一种利用神经毒素诱导大鼠幼鼠孤独症模型的制备方法，其特征在于，包括向大鼠雌鼠注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸后与大鼠雄鼠合笼，产下的幼鼠为大鼠幼鼠孤独症模型；

3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述注射包括注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸的pbs溶液。

4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，包括向大鼠雌鼠体内注射β-n-甲氨基-l-丙氨酸1～1000mg/kg体重大鼠；

5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述注射的方法包括皮下注射。

6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述皮下注射的次数为1次。

7.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，在得到所述大鼠幼鼠孤独症模型后，还包括利用旷场实验进行验证。

8.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，通过雌鼠注射的方法得到的大鼠幼鼠孤独症模型，在幼鼠出生3～6周后进行所述旷场实验，判断幼鼠是否有孤独症行为。

9.根据权利要求7所述制备方法，其特征在于，通过幼鼠注射的方法得到的大鼠幼鼠孤独症模型，在注射1～2周后进行所述旷场实验，判断幼鼠是否有孤独症行为。

10.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述大鼠包括wistar大鼠、sd大鼠、f344大鼠、lewis大鼠、shr大鼠或wky大鼠。