一种脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型的构建方法

本发明属于脓毒症并发症动物模型，具体涉及一种脓毒症并发弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation，dic)小鼠模型的构建方法。

背景技术：

1、脓毒症并发弥散性血管内凝血(disseminated intravascular coagulation，dic)是由感染引起的凝血障碍，同时也是一种导致内皮功能障碍的急性全身性炎症反应，典型表现为广泛的微血栓形成，并伴有不同部位的大量出血，进而导致多器官功能障碍。临床进程包括初期的“纤溶抑制”阶段和后期“消耗性低凝”阶段，“消耗性低凝”是所有类型dic共同特点，而“纤溶抑制”是脓毒症dic明显区别于其他类型dic的临床特点。流行病学数据显示，30％～50％的脓毒症患者会发生dic，约占dic患者总数的50％。脓毒症并发dic的病死率达28％～43％，几乎是无dic患者的2倍。目前，对于脓毒症dic的临床治疗，全球范围内仍然采用肝素、抗凝血酶、血栓调节蛋白等抗凝手段作为主要干预方式。然而，目前抗凝治疗方法总体疗效尚存争议，且有增加严重出血的风险，急需寻找安全有效的药物。

2、一个好的脓毒症dic动物模型是研究该病的病理基础、寻找并开发防治该病药物和研究药物作用机制的前提。目前针对脓毒症dic的动物模型鲜少报道，已有的dic啮齿类动物模型通常采用大剂量注射脂多糖(lipopolysaccharide,lps)或盲肠结扎穿孔(cecalligation and puncture,clp)的方法诱导，但大剂量注射lps诱导dic模型的方法仅表现出脓毒症dic的“纤溶抑制”现象，而“消耗性低凝”现象不明显，未能同时模拟脓毒症dic“纤溶抑制”和“消耗性低凝”的临床特点。clp法诱导的脓毒症dic模型虽具备脓毒症dic“消耗性低凝”的临床特点，但可能由于操作复杂，难以标准化，各实验室所建clp模型对于纤溶系统的表现不一，且手术创伤较大，可重复性差。因此，急需构建操作简单方便、可靠稳定、符合临床实际的动物模型。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种脓毒症dic小鼠模型的构建方法，由该方法构建获得小鼠模型不仅能同时模拟脓毒症dic“纤溶抑制”和“消耗性低凝”两个典型临床特征，且操作简单方便，无创，重复性好，弥补了clp法诱导的脓毒症dic模型手术创伤大、操作复杂、难以标准化和可重复性差的不足，能为筛选防治脓毒症dic的潜在药物，提供准确便捷的实验模型。

2、本发明的目的是通过如下技术方案实现的：

3、一种脓毒症dic小鼠模型的构建方法，通过对小鼠同时腹腔注射角叉菜胶(carrageenan,car)和lps，建立脓毒症dic小鼠模型。

4、优选的，所述car的造模剂量为：按0.1ml/10g的给药体积腹腔注射100mg/kg car溶液。

5、优选的，所述lps的造模剂量为：按0.1ml/10g的给药体积腹腔注射50μg/kg lps溶液。

6、相较于大剂量注射lps的诱导方法，本发明方法显著降低了lps用量，降低了成本。

7、优选的，所述的小鼠为雄性小鼠。

8、本发明还提供上述的构建方法在动物模型构建领域中的应用。

9、优选的，所述的动物模型为脓毒症dic小鼠模型。

10、本发明还提供上述的构建方法获得的脓毒症dic小鼠模型在脓毒症dic研究中的应用，所述研究是以非疾病的诊断或治疗为目的。

11、本发明还提供上述的构建方法获得的脓毒症dic小鼠模型在筛选预防或治疗脓毒症dic的药物中的应用。

12、本发明还提供一种筛选预防或治疗脓毒症dic候选药物的方法，包括将测试候选药物施用于根据上述的构建方法获得的脓毒症dic小鼠模型中的步骤。

13、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

14、本发明在16±1℃环境下通过对雄性km小鼠同时腹腔注射100mg/kg car和50μg/kg lps造模能成功建立脓毒症dic小鼠模型。一方面，该模型能体现出脓毒症中性粒细胞百分计数上升、crp水平升高、il-6水平升高等炎症感染现象；另一方面，与大剂量注射lps诱导的dic模型比较，本模型能同时模拟脓毒症dic“纤溶抑制”和“消耗性低凝”两个典型临床特征，弥补了大剂量注射lps诱导的dic模型仅能模拟“纤溶抑制”特点的不足和大剂量lps造模成本相对高的不足，更加符合脓毒症dic临床进程特点；与clp法诱导的脓毒症dic模型比较，本模型不仅能同时模拟脓毒症dic“纤溶抑制”和“消耗性低凝”两个典型临床特征，且操作简单方便，无创，重复性好，弥补了clp法诱导的脓毒症dic模型因尚未标准化各实验室所建clp模型对纤溶系统表现不一，且手术创伤大、操作复杂、难以标准化和可重复性差的不足，能为筛选防治脓毒症dic的潜在药物，提供准确便捷的实验模型。

1.一种脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型的构建方法，其特征在于，通过对小鼠同时腹腔注射角叉菜胶和脂多糖，建立脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述角叉菜胶的造模剂量为：按0.1ml/10g的给药体积腹腔注射100mg/kg角叉菜胶溶液。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述脂多糖的造模剂量为：按0.1ml/10g的给药体积腹腔注射50μg/kg脂多糖溶液。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的小鼠为雄性小鼠。

5.权利要求1-4任一项所述的构建方法在动物模型构建领域中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的动物模型为脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型。

7.权利要求1-4任一项所述的构建方法获得的脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型在脓毒症并发弥散性血管内凝血研究中的应用，所述研究是以非疾病的诊断或治疗为目的。

8.权利要求1-4任一项所述的构建方法获得的脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型在筛选预防或治疗脓毒症并发弥散性血管内凝血的药物中的应用。

9.一种筛选预防或治疗脓毒症并发弥散性血管内凝血候选药物的方法，其特征在于，包括将测试候选药物施用于根据权利要求1-4任一项所述的构建方法获得的脓毒症并发弥散性血管内凝血小鼠模型中的步骤。