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一种渤丰3号杨经愈伤法高效遗传转化体系的建立方法与流程

2025-05-18 09:40:08 135次浏览

技术特征:

1.一种渤丰3号杨经愈伤法高效遗传转化体系的建立方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤1)消毒处理的条件包括:在洗涤灵水中浸泡30min,于流动的自来水下冲洗2h,沥干水分。

3.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤1)启动培养使用的培养基为:1/2ms+30g/l蔗糖+6.5g/l琼脂粉,ph 5.8~6.0;

4.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤2)生根培养的条件包括:光周期16h/8h,光照强度2000lux,培养温度25℃,湿度为60%~70%,时间为30d。

5.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤3)预培养的条件包括:光周期16h/8h,光照强度2000lux,培养温度25℃,湿度为60%~70%,时间为1~2d。

6.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤4)农杆菌以农杆菌菌液进行侵染,所述农杆菌菌液的od600值为0.4~0.6,所述侵染的时间为10~15min。

7.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤4)共培养的条件包括:避光培养3~4d,培养温度25℃。

8.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤4)抗性愈伤组织诱导的条件包括:光周期16h/8h,光照强度2000lux,培养温度25℃,每10d更换1次培养基。

9.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤5)分化筛选培养的条件包括光周期16h/8h,光照强度2000lux,培养温度25℃,湿度为60%~70%,每10~15d更换1次培养基。

10.根据权利要求1所述的建立方法,其特征在于,所述步骤6)抗性生根培养的条件包括:光周期16h/8h,光照强度2000lux,培养温度25℃,湿度为60%~70%,时间为30d。


技术总结
本发明涉及组织培养及基因编辑技术领域,特别是涉及一种渤丰3号杨经愈伤法高效遗传转化体系的建立方法。包括:将渤丰3号杨的半木质化茎段进行消毒处理,处理成1.5~2cm的单腋芽段后进行启动培养,得到1~2cm的腋芽;将腋芽进行生根培养,得到组培苗;取组培苗顶端2~3片嫩叶、去除边缘,处理成0.5×1cm的块后进行预培养,得到预培养叶片;将预培养叶片进行农杆菌侵染、共培养后进行愈伤组织诱导,得到抗性愈伤组织;将抗性愈伤组织进行分化筛选培养,得到抗性芽;将抗性芽进行抗性生根培养,实现渤丰3号杨遗传转化。采用本发明提供的方法提高了渤丰3号杨愈伤组织遗传转化效率,达到11.48%。

技术研发人员:张伟溪,苏晓华,丁昌俊,张腾倩,张冰玉
受保护的技术使用者:中国林业科学研究院林业研究所
技术研发日:
技术公布日:2024/9/2
文档序号 : 【 39263971 】

技术研发人员:张伟溪,苏晓华,丁昌俊,张腾倩,张冰玉
技术所有人:中国林业科学研究院林业研究所

备 注:该技术已申请专利,仅供学习研究,如用于商业用途,请联系技术所有人。
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张伟溪苏晓华丁昌俊张腾倩张冰玉中国林业科学研究院林业研究所
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