一种具有益气养血作用的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

2025-05-15 10:40:01 459次浏览

专利名称：：一种具有益气养血作用的中药组合物及其制备方法和质量控制方法
技术领域：
：本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，特别是涉及一种具有益气养血作用的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。
背景技术：
：人会生病，所以就有了疾病与健康之分。健康者无病也，有病者就是不健康。健指躯体上上的健全、强盛，康指心态上的欢乐安康。病指躯体上的形态伤害和缺损。但现代社会却出现了一种无躯体形态上病变的证据，而却有软弱无力，精疲力竭，食不思，饭不香，睡不宁，无精打采。说他病，无证据，说他健康，却不符标准。这时一个新的概念出现了，这就是亚健康。世界卫生组织认为健康是一种身体、精神和交往上的完美状态，而不只是身体无病。根据这一定义，经过严格的统计学统计，人群中真正健康(第一状态)和患病者(第二状态)不足2/3，有1/3以上的人群处在健康和患病之间的过度状态，世界卫生组织称其为"第三状态"，国内常常称之为"亚健康"状态。"第三状态"状态处理得当，则身体可向健康转化；反之，则患病。因此，对亚健康状态的研究，是下个世纪生命科学研究的重要组成部分。广州医学院人文社会科学研究所董玉整教授说。据世界卫生组织一项全球性调査结果表明，全世界真正健康的人仅占5%，经医生检査、诊断有病的人也只占20%，75%的人处于亚健康状态。"亚健康"是一个新的医学概念。本世纪70年代末，医学界依据疾病谱的改变，将过去单纯的生物医学模式，发展为生物-心理-社会医学模式。1977年，世界卫生组织(WHO)将健康概念确定为"不仅仅是没有疾病和身体虚弱，而是身体、心理和社会适应的完满状态"。80年代以来，我国医学界对健康、与疾病也展开了一系列的研究，其结果表明，当今社会有一庞大的人群，身体有种种不适，而上医院检查又未能发现器质性病变，医生没有更好的办法来治疗，这种状态称为"亚健康状态"。《内经》日:"圣人不治已病治未病，夫病已成而后药之，乱已成而后治之，譬犹渴而穿井，斗而铸兵，不亦晚乎？"由此可见我们的祖先早已认识到所谓"未雨绸缨、防患未然"的重要性。现在发明一种针对虚极欲脱、脉微欲绝、肢冷、自汗、阴虚内热、肺虚咳喘、气短无力、神志不安、失眠、头昏、精神疲乏、食少泄泻、中气下陷、内脏下垂、口渴多饮、肢体浮肿、面色苍黄、食欲不振、体弱、易感冒者、心悸、月经不调、便秘、舌红少苔、心脑血管疾病、糖尿病、记忆力减退、心肌营养不良、冠状A粥样硬化、神经官能症、慢性溃疡等多种身体不适现象有缓解、治疗作用的中药组合物。
发明内容本发明目的在于提供一种具有益气养血作用的中药组合物；本发明目的还在于提供一种具有益气养血作用的中药组合物制备方法；本发明目的还在于提供一种具有益气养血作用的中药组合物的质量控制方法'本发明目的是通过如下技术方案实现的本发明所述的具有益气养血作用的中药组合物是由如下重量比的原料药制黄茛30-160重量份当归10-90重量份五味子10-90重量份地骨皮10-90重量份成的人参2-16重量份麦冬20-100重量份地黄10-90重量份陈皮10-90重量份淫羊藿20-120重量份；上述原料优选配比为黄芪40重量份当归20重量份五味子80重量份地骨皮15重量份30-120重量份白术10-90重量份制何首乌10-90重量份1-9重量份人参地黄陈皮淫羊;14重量份90重量份23重量份73重量份30重量份；50重量份白术80重量份制何首乌20重量份鹿茸7重量份上述原料优选配比为人参4重量份麦冬90重量份地黄80重量份陈皮20重量份淫羊藿100重量份；本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、喷雾剂、颗粒剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。本发明所述的中药组合物口服液制剂的制备方法为制法:鹿茸切片，加水煎煮2-3次，每次5-9倍量，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至15-30。C相对密度1.10—1.35，力口2-4倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余原料药加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至15-3(TC相对密度1.10—1.35，与上述备用液合并，加入蔗糖133重量份、炼蜜267重量份，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000体积份，搅匀，即得。本发明所述的中药组合物口服液制剂的制备方法优选为制法:鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度U9(2(TC),与上述备用液合并，加入蔗糖133重量份、炼蜜267重量份，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000体积份，搅匀，即得。本发明所述的组合物中重量份/体积份与g/ml相对应。本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(1)取相当所述组合物原料药10-14g的组合物制剂,加入甲醇20-30ml,超声20-40分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，用30-50%甲醇40-60ml洗脱，黄芪130重量份当归15重量份五味子20重量份地骨皮80重量份党参30重量份白术30重量份制何首乌80重量份鹿耷3重量份收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2-3次，每次10-20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2-4次，每次8-12ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液1(^1，供试品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-16:35-45:20-25:8-13的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置10-14小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取相当所述组合物原料药22-26g的组合物制剂，以水饱和的正丁醇提取2-4次，正丁醇液以氨试液提取2-4次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱上，以30-50%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10pl、对照品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-16:36-43:20-24:8-13氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水8-12"C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加热8-13分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以70-80:25-30的水-乙腈为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含10(^g的溶液；供试品溶液的制备精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种10鉴别(1)取相当所述组合物原料药12.5g的组合物制剂,加入甲醇25ml,超声30分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液10nl，供试品溶液5^1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇_水于5-10。C放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取相当所述组合物原料药25g的组合物制剂，以水饱和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨试液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱(100-120目，5g,内径10-15mm)上，以40%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10pl、对照品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水10。C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于IOO'C加热IO分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅垸键合硅胶为填充剂；以73:27的水-乙腈为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含100pg的溶液；供试品溶液的制备精密量取相当于所述组合物原料药2.5g的组合物制剂置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。上述质量控制方法可用于各种制剂，不同剂型质量控制时，供试品溶液制备所选取的制剂量均折合为相同的原料药量。本发明组合物具有很好的药效，相比现有制剂川芎石膏饮表现出很好的药效。本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1:药物组I(川芎210g、白芷105g、羌活95g、细辛45g、防风55g、薄荷520g、荆芥210g、甘草105g)对照组市售复方参花颗粒本发明药物组对机体免疫功能的影响1本发明药物组对NIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响1.1试验材料(1)受试药物本发明药物组，每ml相当于原生药0.7g，实验以生药量计。川芎石膏饮，购市售；(2)实验动物MH小鼠，18-20克，雌雄兼用，为一级实验动物；(3)5X鸡红血球(CRBC)，购市售公鸡一只，本实验组制备。1.2试验方法取50只小鼠，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，本发明药物组三个剂量组分别为60mg、120mg、240mg(生药材量)/kg，川芎石膏饮组270mg/kg，对照组为同等剂量生理盐水，药物按剂量用生理盐水配制，每只动物每天灌胃2ml，连续给药8天。第七天每鼠腹腔注射0.8X肝糖元lml，24hr后腹腔注射5%鸡红血球0.5ml，3hr后颈椎脱臼法处死小鼠，立即腹腔注射阿氏液(Alsever's)lml，按摩腹部后取腹腔液滴片，每只鼠2片，温育30分钟，用4%姬姆萨-瑞士染色3-5分钟，漂洗、凉干，在油镜下每片计数巨噬细胞200个，按下式计算吞噬百分率和吞噬指数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数吞噬百分率=-xioo%200个巨噬细胞被吞噬的鸡红细胞数吞噬指数=-X100%200个巨噬细胞与对照组比较本发明药物组的三个剂量组60mg、120mg、240mg(生药量)/kg都能显著地提髙NIH小鼠的腹腔巨噬细胞的吞噬功能，并有量效关系，阳性对照组川芎石膏饮都有显著作用(见表l)。1.3结果表1本发明药物组对NIH小鼠腹腔巨噬细胞吞噬细胞吞噬功能的影响(X士SD)组别齐糧(mg/kg)动物数(只)吞噬百分率(%)吞噬指数对照-1029.4±4.700.502±0.021川芎石膏饮2701054.7±6.81**0.868±0.209**本发明药物组601058.4±5.50**0.993±0.118**本发明药物组1201055.2±4.32**0.957±0.143**本发明药物组2401049.6±7.20*0.701±0.215*注*P<0.05**P<0.01与对照组比较2本发明药物组对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响2.1材料与方法(1)本发明药物组原制品加水再煎后，形成相当于原制品50%浓度的煎剂。(2)小白鼠20只，体重18-22克，由湖北医科大学附属二院动物房提供。(3)实验方法将20只小白鼠随机分为2组，一组灌胃给予本发明药物组煎剂每日l毫升(12.5g(生药)/kg)对照组给予等量生理盐水，连续5天，末次给药后40分钟，每只小鼠腹腔内注射2%鸡血球悬液1毫升，30分钟后，颈椎脱臼处死动物，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁的皮肤，经腹膜注入生理盐水l毫升，转动鼠板l分钟，然后吸出腹腔洗液l毫升，平均分滴于4片载玻片上，放入湿盆中37'C孵育30分钟。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片的细胞，晾下，染色，在显微镜下査200个巨噬细胞吞噬鸡血球数，计算出每百个巨噬细胞的吞噬指数。2.2结果见表2表2本发明药物组对小鼠腹腔巨噬细胞的影响(X士SD)组别小鼠数吞噬率吞噬指数P值对照组1031.92±14.31680.6606±0.28958实验组1046.835±12.730.98075±0.2304PO.05该实验用鸡血球作为异物，注入小鼠腹腔后，引起小鼠腹腔内巨噬细胞的吞噬，与未服用本发明药物组的小鼠比较，其吞噬百分率和吞噬指数都有明显提高，P<0.05，证明本发明药物组能增强巨噬细胞的吞噬功能，有提高机体免疫作用。3本发明药物组对ConA诱导小鼠体内淋巴细胞增殖作用的影响3.1实验材料(1)受试药物本发明药物组(2)实验动物雄性NIH小鼠18-20g，为一级动物，由四川抗菌素工业研究所提供。(3)诱导剂刀豆素A(ConA)，四川大学生物系生化教研室提供，批号930411。3.2实验方法取雄性小鼠60只，随机分为6组，每组10只，本发明药物组设三个剂量组即240mg、120mg、60mg(生药)/kg;—个对照组，一个为空白组对照，给溶剂(0.5%CMC)，另一个给予溶剂加诱导剂ConA。各组每日每只鼠灌服0.4ml，连续8天，给药的第一天同时每鼠肌肉注射ConA2mg/kg(空白组除外)，连续三天。第8天末次给药后3小时，动物剪尾采血涂片，瑞士染色，油镜下计数200个淋巴细胞中淋巴母细胞和过滤态细胞的百分率，同时摘眼球处死动物，解剖取出脾脏，称取体重和脾重、计算脾指数。3.3实验结果口服本发明药物组每日240mg、120mg、60mg(生药)/kg以及川芎石膏饮270mg/kg都能使小鼠对ConA剌激的转化反应增强，淋巴母细胞百分率与对照组比较均有显著性提高，说明本发明药物组能提高T淋巴细胞的应答功能即提高细胞免疫功能。见表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注*:PO.05**:P<0.01与对照组比较脾指数检査结果如表4，实验组与对照组有显著性差异与阳性组相当，说明本发明药物组能增加ConA诱导的脾细胞增殖效应。表4本发明药物组对小鼠脾脏重量的影响(X士SD)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>注*:PO.05**:PO.01与加ConA对照组比较4本发明药物组对病人淋巴细胞转化试验的影响为了了解本发明药物组对机体免疫功能方面的影响，我们进行了本发明药物组对淋巴细胞转化的试验。4.1材料与方法对照组(1)正常人的淋巴细胞+PNA(2)SLE患者的淋巴细胞+PHA实验组(1)正常人的淋巴细胞+PNA+本发明药物组(2)SLE患者的淋巴细胞+PHA+本发明药物组本发明药物组自制成无菌的液体，分装安瓶，每毫升约含原制品0.1克。实验方法无菌采血，收集淋巴细胞，调整细胞浓度2xl0Vml，在细胞培养板中，加入PHA、淋巴细胞及上述本发明药物组的稀释液，置37i:培养72小时，染色，读片。4.2结果与讨论T淋巴细胞与PHA—起体外培养，可以转化成淋巴母细胞，在这个实验中，我们分别用正常人和SLE患者的血淋巴细胞与PNA刺激，并加以本发明药物组共同培养，同时设立不加本发明药物组的对照，了解淋巴细胞转化的情况。结果表明，PHA诱导正常人加入本发明药物组与不加本发明药物组的淋巴细胞转化的影响，其P值远远大于0.05，而诱导SLE患者的淋巴细胞转化率，其P值小于0.05，即本发明药物组对正常人的淋巴细胞转化率无明显作用，而对SLE患者(免疫功能低下)的淋巴细胞转化则有调节作用。从而证明，本发明药物组有一定的增强免疫功能的作用。(附表5、6)表5正常人对PHA刺激的淋巴细胞转化率<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表6SLE患者对PHA刺激的淋巴细胞转化率<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>5本发明药物组对SLE患者外周血淋巴细胞IL-2释放的影响我们用夹心法、ELISA进行了本发明药物组对SLE患者外周血淋巴细胞IL-2释放的影响。5.1材料与方法(1)外周血淋巴细胞的来源本院皮肤科已确诊为SLE住院病人的血。(2)本发明药物组自制成品，经再次煎，制成含原制品浓度10-2、10-3、10-4、10-5的无菌液体，分装安瓶、备用。(3)IL-2:比利时进口，包括R-H、M-H。(4)ABC试剂。(5)本发明药物组对患者周围血淋巴细胞IL-2释放的影响的实验方法将不同浓度的本发明药物组分别与患者的血淋巴细胞共同培养，并设立不加本发明药物组的对照组，置37'C二氧化碳孵箱中培养72小时。(6)Sandwich法ELISA测培养上清中的IL-2水平的实验方法IL-2R-H作为抗包板，二抗IL-2M-H，生物素化抗鼠IgG作为桥抗，再加入混合后的ABC试剂，最后用OPD进行底物反应，在波长429nm处读光密度。并计算IL-2释放的抑制率。5.2结果与讨论见表7表7本发明药物组对SLE患者外周血淋巴细胞IL-2释放的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>这一试验，初步证明，本发明药物组能抑制PHA刺激后SLE患者的单一核白细胞介素II的释放使其分泌减少。6本发明药物组对小鼠血清溶菌酶的影响6.1实验材料(1)实验药物本发明药物组。(2)实验动物NIH小鼠，18-20克，雌雄兼用，为一级实验动物，由四川抗菌素工业研究所实验动物室提供，动物证号川动管002353。(3)标准溶菌酶中科院上海生化所东风生化技术公司生产，活性单位10000单位/mg，批号9305133。(4)底物指示菌黄色微球菌(Microeeuslysodekticus)，由北京中科院微生物所菌种室提供，菌号1.634。6.2实验方法取小鼠50只，随机分成5组，每组10只，雌雄各半，本发明药物组三个剂量组和川芎石膏饮组均每只小鼠每只灌胃0.4ml药液，对照组动物给予同体积的溶剂(0.5XCMC)，连续8天。末次给药后2小时，眼眶后静脉采血，分离血清备用。琼脂平板打孔法测定溶菌酶活性称取琼脂加入PH6.4的0.067mol/LPBS溶液中，配成1%琼脂缓冲液，再在50-6(TC加入刮取的新鲜微球菌，配成浊悬液，用72型分光光度计波长60nm测定，调整其浓度达到透光率30-40%，倒入9cm直径的平皿内，凝固后用玻璃管打孑L，直径2.5mm，孔距15mm,厚度3-4mm;同时新鲜配制溶菌酶标准液，用PH6.4PBS稀释成10，20，40，80，100，200,300,400，500，800ng/ml浓度试液。测定时用微量进样器分别吸取每只鼠的血清20pl注入含菌琼脂平皿的孔中，标准液也吸20W测量，每个样品滴3孔，温育(24-26。C)18小时后，用游标卡尺(精确到0.02mm)测量溶菌环直径，用半对数纸绘制标准曲线，从线上査出血清样品所含溶菌酶的吗数。6.3实验结果NIH小鼠口服本发明药物组8天后，测得血清溶菌酶含量如表12所示，以与对照组进行统计分析比较，口服本发明药物组240mg(生药)/kgXday组极显著地提高血清溶菌酶的含量，与川芎石膏饮相同，口服270mg/kgXday组与对照比较也有显著意义地提高，本发明药物低剂量组60mg(生药)/kgXday提高程度不显著。实验结果表明，小鼠灌服本发明药物能显著地提高血清溶酶的含量。与剂量增加成平行关系。表8本发明药物组对NIH小鼠血清溶菌酶含量的影响(X士SD)组别齐懂(mg/kg)动物数(只)血清溶菌酶含量对照-10390±26川芎石膏饮27010456±38**本发明药物组24010570±53**本发明药物组12010470±39*本发明药物组6010438±45注*:P<0.05**:PO.01与对照组比较6.4结论体外抑制病毒试验结果表明，本发明药物组对HIV和HBV均有一定抑制作用，而细胞毒性不大。本发明药物组对人和动物免疫功能影响试验结果表明，能提高淋巴细胞转化率；抑制PHA刺激患者的单一白细胞介素II释放使其分泌减少增强巨噬细胞吞噬功能和提高溶菌酶的生成。证实本发明药物组有一定修饰免疫功能作用。197.本发明药物组的免疫增强作用对13例患者在治疗后第9、10个月的全血进行了CD4、CD8、CD4/CDs的定量检测，免疫细胞CD4增加^50cells4U者6人；增加1-49cells/pl者3人下降不足50cells/pl者2人；下降超过50cells/pl者2人。原安慰剂对照组的17例患者接受本发明药物组治疗2.5、3.5个月全血中CD4、CD8、CD4/CD8的定量检测结果是CD4增加^50cells/iil者7人；增加0-49cells/^者l人；下降不足50cells4il者3人；下降超过50cells/pl者6人。研究表明本发明药物组有增强fflV/AIDS患者的免疫，减缓CD4细胞的破坏的作用。详见以下图表服用本发明药物组10月fflV-lRNA、CD4变化一览表<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果具体实施方式党参75g白术(炒)33.3g制何首乌30g鹿茸1.7g实施例l:软胶囊人参(去芦)8.3g黄芪83.4g麦冬50g当归33.3g地黄33.3g五味子25g陈皮33.3g地骨皮25g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—L25(20'C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次,第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20°C),减压干燥，粉碎成细粉，加入植物油及上述备用液，混匀，制成100粒，即得。党参75g白术(炒)33.3g制何首乌30g鹿茸1.7g实施例2:滴丸人参(去芦)8.3g黄芪83.4g麦冬50g当归33.3g地黄33.3g五味子25g陈皮33.3g地骨皮25g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—L25(2(TC)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20。C),与上述备用液合并，加入全部熔融的聚乙二醇，搅拌均匀，由上往下，滴入液体石蜡133g，即得。实施例3:泡腾剂人参14g黄芪40g党参50g麦冬90g当归20g白术80g地黄23g五味子80g制何首乌20g陈皮73g地骨皮15g鹿茸7g淫羊藿30g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—L25(20。C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第—次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20'C),与上述备用液合并，减压干燥成干膏，粉碎成细粉，加入适量碳酸氢钠、枸橼酸和蔗糖133g、甜菊素26g，制成颗粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成460g，即得。实施例4:口服液人参4g黄芪130g党参30g麦冬90g当归15g白术30g地黄80g五味子20g制何首乌80g陈皮20g地骨皮80g鹿茸3g淫羊藿100g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20。C),与上述备用液合并，加入蔗糖133g、炼蜜267g，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000ml，搅匀，即得。实施例5:人参4g黄芪130g党参30g麦冬90g当归15g白术30g地黄80g五味子20g制何首乌80g陈皮20g地骨皮80g鹿茸3g淫羊藿100g;制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—1.25(20°C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20。C)，与上述备用液合并，加入蔗糖133g、炼蜜267g，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000ml，搅匀，即得。质量控制方法鉴别(1)取本品25ml,加入甲醇25ml,超声30分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液lOpl,供试品溶液5^1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取本品50ml，以水饱和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨试液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，以40%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10W、对照品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加热10分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；水-乙腈(73:27)为流动相；检测波长为270nm,理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含10(Hig的溶液；供试品溶液的制备精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。黄芪83.4g当归33.3g五味子25g地骨皮25g党参75g白术(炒)33.3g制何首乌30g鹿茸1.7g实施例6:口服液人参(去芦)8.3g麦冬50g地黄33.3g陈皮33.3g淫羊藿50g制法:以上十三味，鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—1.25(2(TC)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(20'C),与上述备用液合并，加入蔗糖133g、炼蜜267g，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000ml，搅匀，即得；鉴别(1)取本品20ml,加稀硫酸5ml,煮沸5分钟，放冷，滤过，取滤液加乙醚15ml，振摇提取，提取液浓縮至2ml,加20%氢氧化钠溶液lml，振摇，放置，碱液层显红色，醚液层转为无色；(2)取本品25ml,加入甲醇25ml，超声30分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液l(HU，供试品溶液5nl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑占."、、，(3)取本品50ml，以水饱和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨试液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，以40%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10pl、对照品溶液5nl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加热IO分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；水-乙腈(73:27)为流动相；检测波长为270nm,理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供试品溶液的制备精密量取本品5ml于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。本品每支含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4Q015)计，不得少于l.Omg。功能主治:益气养血。用于身体虚弱，气短心悸，面色不华。用法用量:口服，一次1520ml,—日3次。规格:每支10ml权利要求30-120重量份白术10-90重量份制何首乌10-90重量份1-9重量份1、一种具有益气养血作用的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组成为黄芪30-160重量份当归10-90重量份五味子10-90重量份地骨皮10-90重量份人参2-16重量份麦冬20-100重量份地黄10-90重量份陈皮10-90重量份淫羊藿20-120重量份。2、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物中的原料药组成中黄芪40重量份当归20重量份五味子80重量份地骨皮15重量份人参14重量份麦冬90重量份地黄23重量份陈皮73重量份淫羊藿30重量份。3、如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物的原料药组50重量份白术80重量份制何首乌20重量份7重量份黄芪130重量份当归15重量份五味子20重量份地骨皮80重量份30重量份白术30重量份制何首乌80重量份3重量份成为人参4重量份麦冬90重量份地黄80重量份陈皮20重量份淫羊藿100重量份。4、如权利要求1-3所述的任一种药物组合物，其特征在于该药物组合物按常规工艺加入辅料制成片剂、胶囊、口服液、滴丸、颗粒剂。5、如权利要求4所述的药物组合物的口服液制备方法，其特征在于该方法为鹿茸切片，加水煎煮2-3次，每次5-9倍量，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至15-30。C相对密度1.10—1.35，力Q2-4倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余原料药加水煎煮2-4次，每次2-4小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至15-30'C相对密度1.10—1.35，与上述备用液合并，加入蔗糖133重量份、炼蜜267重量份，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000体积份，搅匀，即得。6、如权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于该方法为鹿茸切片，加水煎煮二次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次3小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.20—L25(20。C)，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等十二味，加水煎煮二次，第一次3小时，第二次2小时，合并煎液，滤过，滤液浓縮至相对密度1.19(2(TC),与上述备用液合并，加入蔗糖133重量份、炼蜜267重量份，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000体积份，搅匀，即得。7、如权利要求1-3所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(1)取相当所述组合物原料药10-14g的组合物制剂,加入甲醇20-30ml,超声20-40分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，用30-50%甲醇40-60ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2-3次，每次10-20ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2-4次，每次8-12ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液10pl，供试品溶液5]il，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-16:35-45:20-25:8-13的氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-10匸放置10-14小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取相当所述组合物原料药22-26g的组合物制剂，以水饱和的正丁醇提取2-4次，正丁醇液以氨试液提取2-4次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱上，以30-50%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液1(^1、对照品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以13-16:36-43:20-24:8-13氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水8-12'C以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以8-12%硫酸乙醇溶液，于100'C加热8-13分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；含量测定照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以70-80:25-30的水-乙腈为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供试品溶液的制备精密量取相当于所述组合物原料药2.5g的组合物制剂置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理20-40分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各lOpl,注入液相色谱仪，测定，即得。8、如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种鉴别(l)取相当所述组合物原料药10-14g的组合物制剂，加入甲醇25ml，超声30分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱(100-120目，5g，内径10-15mm)上，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液iow，供试品溶液5nl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:lO氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-10。C放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取相当所述组合物原料药22-26g的组合物制剂，以水饱和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨试液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱上，中性氧化铝柱为100-120目，5g，内径10-15mm，以40%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10pl、对照品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10°/。硫酸乙醇溶液，于IOO'C加热IO分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以73:27的水-乙腈为流动相；检测波长为270nm，理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含100pg的溶液；供试品溶液的制备精密量取相当于所述组合物原料药2.5g的组合物制剂置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10^1,注入液相色谱仪，测定，即得。9、如权利要求7所述的药物组合物的质量控制方法，其特征在于该质量控制方法包括如下步骤鉴别(l)取相当所述组合物原料药10-14g的组合物制剂,加入甲醇25ml,超声30分钟，滤过，滤液加于中性氧化铝柱上，中性氧化铝柱为100-120目，5g，内径10-15mm，用40%甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加水15ml溶解，水溶液用水饱和正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗2次，每次10ml;弃去水层，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取橙皮苷对照品、淫羊藿苷对照品，分别加甲醇制成每lml含0.2mg和0.5mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法试验，吸取上述对照品溶液10pl，供试品溶液5pl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水于5-l(TC放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；(2)取相当所述组合物原料药22-26g的组合物制剂，以水饱和的正丁醇提取3次，正丁醇液以氨试液提取3次，正丁醇液水浴蒸干，以2ml甲醇溶解后加于中性氧化铝柱上，中性氧化铝柱为100-120目，5g，内径10-15mm，以40%甲醇洗脱，洗脱液水浴蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液l(Hil、对照品溶液5^1，分别点于同一硅胶G薄层板上，以15:40:22:10氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水l(TC以下放置过夜的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于IO(TC加热IO分钟；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；照高效液相色谱法测定；色谱条件与系统适用性试验用十八垸基硅垸键合硅胶为填充剂；以73:27的水-乙腈为流动相；检测波长为270nm,理论塔板数按淫羊藿苷计算应不低于1500;对照品溶液的制备精密称定淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每lml含100ng的溶液；供试品溶液的制备精密量取相当于所述组合物原料药2.5g的组合物制剂置于25ml量瓶中，精密加入乙醇至刻度，密塞，摇匀,称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45pm)滤过，即得；测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10pl，注入液相色谱仪，测定，即得。全文摘要本发明公开了一种具有益气养血作用的药物组合物及制备方法和质量控制方法。本发明的药物组合物原料药组成为人参、黄芪、党参、麦冬、当归、白术、地黄、五味子、制何首乌、陈皮、地骨皮、鹿茸、淫羊藿组成，制备方法为鹿茸切片，加水煎煮，滤过，滤液浓缩，加3倍量乙醇，沉淀，滤过，回收乙醇，备用；其余党参等加水煎煮合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.19(20℃)，与上述备用液合并，加入蔗糖133g、炼蜜267g，煎煮30分钟，冷却后加入香精、对羟基苯甲酸乙酯适量，调整总量至1000ml，搅匀，即得。本发明采用高效液相色谱法对淫羊藿进行含量测定。本发明药物组合物具有显著的益气养血作用。文档编号A61K35/32GK101310751SQ20071009950公开日2008年11月26日申请日期2007年5月23日优先权日2007年5月23日发明者付建家,付立家申请人:北京亚东生物制药有限公司

文档序号 : 【 1180856 】

技术研发人员：付立家,付建家
技术所有人：北京亚东生物制药有限公司

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