异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法

本发明属于水果采后病害生物防治，具体涉及异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法。

背景技术：

1、草莓(fragaria ananassa duchesne)属蔷薇科，多年生草本植物。其果实外观呈心形，口感酸甜，果肉多汁，香味浓郁，富含多种矿物质、糖类、氨基酸等，还有生物活性成分如维生素、类胡萝卜素、酚类物质以及叶酸等。草莓是最重要的经济作物之一，在世界各地广泛种植，享有“水果皇后”的美称，受到了消费者的广泛喜爱。然而，由于草莓果皮极薄，组织柔软，含水量高，采摘后在其贮藏、运输和销售过程中极易受到机械损伤和不良环境的影响，导致草莓果实表皮结构遭受破坏，从而为病原真菌侵染创造机会，最终造成真菌性病害的发生，使得草莓产业遭受巨大的经济损失。而且草莓在常温下不宜久置，常温贮藏1-2天即开始变色、变味，甚至腐烂变质，失去食用价值，这给草莓的种植和贮藏带来很大不便。

2、导致草莓采后腐烂的主要病原菌是灰霉病菌、匍枝根霉、毛霉属、炭疽菌属、青霉菌属等。其中以由匍枝根霉(rhizopus stolonifer)引起的软腐病害尤为严重。该病害在发病初期其病部呈水渍状圆斑，随着病程的发展其病斑直径逐渐扩大并伴随发生褐变，同时在其病斑表面密生出匍枝根霉的灰白色菌丝，菌丝顶端有肉眼可见的圆形孢子囊，起初为白色，生长2d后变为黑色，到了病程后期草莓果实病部果肉组织彻底崩溃液化，最终发生腐烂变质。草莓采后软腐病的发生严重损坏了草莓的果实品质和经济价值。因此寻找安全有效的防治病害方法迫在眉睫，如何延长草莓货架期，降低病害的发生仍是研究热点。

3、传统上，控制草莓病害的方法主要是使用化学杀菌剂。然而，杀菌剂的长期使用导致了杀菌剂残留、病原体抗性、环境污染和损害人体健康等诸多问题。近年来，应用微生物拮抗剂来控制水果采后病害引起了广泛关注。这种环保方法已经成为化学杀真菌剂最有前途的替代方法之一。在各类微生物拮抗剂中，酵母菌占据着重要地位。拮抗酵母因其分布广泛、拮抗能力强、环境友好、对人体安全等优点，在过去的几十年里得到了广泛的研究。目前拮抗酵母已被广泛用于水果如葡萄、梨、苹果、柑橘等采后病害的控制，且已取得了良好的效果。

4、然而，目前国内外关于拮抗酵母控制草莓采后病害的研究还不够全面，限制了拮抗酵母生防制剂的推广和使用。因此筛选出一株能有效控制草莓采后软腐病，减缓果实自然腐烂，延长果实货架期，保持果实营养价值和感官品质的拮抗酵母十分必要。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的是利用异常威克汉姆酵母实现对草莓采后软腐病控制，降低草莓采后自然腐烂率的同时对草莓品质无不良影响，可达到水果贮藏保鲜的目的，减少采后病害造成的经济损失，实现了意想不到的突出效果。

2、为了实现以上目的，本发明提供方案如下：

3、异常威克汉姆酵母对草莓采后病害防治及贮藏保鲜的方法，具体步骤如下：

4、将异常威克汉姆酵母于nydb培养基中进行活化培养，活化培养后经离心得到菌体沉淀，将菌体沉淀用无菌水洗涤后，用无菌生理盐水稀释制备成酵母菌悬液；在草莓表面用无菌打孔器进行打孔，然后在每孔分别注入一定体积的酵母菌悬液，自然晾干一段时间后再于每孔分别接种与酵母菌悬液等体积的匍枝根霉孢子悬浮液，由此验证异常威克汉姆酵母对由匍枝根霉引起的草莓果实软腐病的有效防治；所述酵母菌悬液的浓度为1×105～1×109cells/ml；所述匍枝根霉孢子悬浮液的浓度为1×104spores/ml；

5、或者不对草莓进行处理，保持草莓的自然状况放入塑料筐中，将酵母菌悬液均匀喷洒于草莓表面，待草莓自然晾干后，用保鲜膜密封，置于恒温恒湿条件下保存，即可实现对草莓采后病害的防治及贮藏保鲜的目的。

6、其中，所述的nydb培养基的组分为，以1l计：酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，蒸馏水定容至1000ml，ph自然，115℃灭菌20min。

7、其中，所述活化培养的步骤为：将异常威克汉姆酵母接种在培养基nydb中，于28℃、180rpm条件下，进行第一次活化培养，培养20-24h得到第一次活化培养液；然后将第一次活化培养液按照1％的接种量转接至新的nydb培养基中，于28℃、180rpm条件下，继续第二次活化培养，培养20-24h得到活化培养液。

8、其中，所述离心的条件均为：离心力为10000g，时间5min。

9、其中，所述无菌生理盐水的质量浓度为0.85％。

10、其中，所述打孔的孔直径5mm，深度4mm；所述一段时间为2h。

11、其中，所述酵母菌悬液的浓度为1×108～1×109cells/ml。

12、其中，所述在孔中注入酵母菌悬液和匍枝根霉孢子悬浮液的体积均为15μl。

13、其中，所述恒温恒湿的条件为，20℃，rh 95％。

14、本发明的优点：

15、(1)本发明所使用的异常威克汉姆酵母拮抗效力强，对人体无害；本发明利用异常威克汉姆酵母针对性的控制草莓采后软腐病，能够有效控制果实的腐烂，在1×108cells/ml的浓度条件下相比于对照组，其腐烂率降低了70％以上，效果十分显著。

16、(2)本发明所使用的异常威克汉姆酵母对采后草莓主要品质指标，如失重率、褐变度、可溶性固形物、可滴定酸以及抗坏血酸与对照组相比，无任何不良显著影响。

17、(3)本发明使用异常威克汉姆酵母既可以代替化学杀菌剂防治草莓采后病害，避免化学杀菌剂对人体及环境的潜在危害，也可减少使用物理杀菌贮藏所产生的经济和能源负担，具有显著的经济效益和社会效益。

1.异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，具体步骤如下：

2.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述的nydb培养基的组分为，以1l计：酵母膏5g，牛肉浸膏8g，葡萄糖10g，蒸馏水定容至1000ml，ph自然，115℃灭菌20min。

3.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，将异常威克汉姆酵母接种在培养基nydb中，于28℃、180rpm条件下，进行第一次活化培养，培养20-24h得到第一次活化培养液；然后将第一次活化培养液按照1％的接种量转接至新的nydb培养基中，于28℃、180rpm条件下，继续第二次活化培养，培养20-24h得到活化培养液。

4.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述离心的条件均为：离心力为10000g，时间5min。

5.根据权利要求1所述的异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述无菌生理盐水的质量浓度为0.85％。

6.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述打孔的孔直径3mm，深度3mm；所述一段时间为2h。

7.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述酵母菌悬液的浓度为1×108～1×109cells/ml。

8.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述匍枝根霉孢子悬浮液的浓度为1×104spores/ml。

9.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述在孔中注入酵母菌悬液和匍枝根霉孢子悬浮液的体积均为15μl。

10.根据权利要求1所述异常威克汉姆酵母防治草莓采后软腐病及采后贮藏保鲜的方法，其特征在于，所述恒温恒湿的条件为，20℃，rh 95％。