一种用于抗菌镇痛的中药组合物及其制备方法和应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种具有抗菌镇痛作用的中药组合物。该药物组合由地骨皮纯化活性部位及桑白皮纯化活性部位按生药量1∶1配比组成。该组合物所含活性成分为甜菜碱、东莨菪内酯及桑根白皮素。采用HPLC法测定活性成分的含量，三者总含量大于80％。该中药组合物的抗菌镇痛效果显著，明显高于单味药的作用。该组合物可用于防治细菌感染、各类疼痛及炎症的药物制剂中，也包括在牙膏、漱口水及口香糖等保健品中的使用。
【专利说明】一种用于抗菌镇痛的中药组合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药组合物领域，涉及一种具有抗菌、镇痛作用的中药组合物，特别涉 及该组合物是由地骨皮纯化活性部位与桑白皮纯化活性部位配合而成。该组合物的活性成 分明确，成分总含量HPLC法测定大于80% ;抗菌镇痛作用效果显著高于单味药。
【背景技术】
[0002] 地骨皮为爺科植物枸杞Lycium chinense Mill.或宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥根皮。其性寒，味甘。归肺、肝、肾经。具有凉血除蒸，清肺降火的功效。用于治疗 阴虚潮热，骨蒸盗汗，肺热咳嗽，咯血，衄血，内热消渴等症。
[0003] 桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮。其性平，味甘。归肝经。具有 祛风湿，利关节的功效。用于治疗风湿痹病，肩臂、关节酸痛麻木等症。
[0004] 文献中对单味地骨皮及单味桑白皮的抗炎镇痛作用有一些报道，但没有两者配合 用于此功效方面的研究，更无以两者纯化活性部位组合使用的记载。目前文献报道的实验 内容存在以下明显缺陷：（1)均为简单粗糙提取物，例如水提取物或醇提取物等，技术含量 低；(2)所述提取物中的活性成分不明确，无准确的指标成分作为含量测定的标准：（3)疗 效不显著。这些不确定因素直接影响地骨皮及桑白皮提取物作为药物的疗效以及在制剂中 的应用。
[0005] 鉴于以上原因，研制出一种疗效显著，活性成分明确，有效成分含量高的抗菌镇痛 中药组合物，在中药新药开发中显得尤其重要。
【发明内容】
[0006] 鉴于现有技术的不足，本发明的目的在于通过对地骨皮、桑白皮中化学成分的理 化性质进行研究，采用先进的分离技术分别制备了地骨皮及桑白皮的纯化活性部位，并将2 个活性部位按比例配伍形成一种中药组合物。该组合物中主要活性成分为甜菜碱、东莨菪 内酯及桑根白皮素，三者总含量达到80%。此中药组合物的抗菌镇痛作用显著，可制成针对 各种适应症的药物制剂，例如外用或内服治疗细菌感染、疼痛及相应炎症等，亦包括各类防 治口腔疾病的制剂和用品。
[0007] 为了达到本发明的目的，发明人进行了大量试验研究，确定了如下技术方案：
[0008] 抗菌镇痛中药组合物的制备工艺，步骤为：1.地骨皮活性部位的制备：（1)取地骨 皮药材适量，先用水提法提取得提取物；（2)将上述提取物采用HPD400型大孔树脂分离，分 别收集水洗脱液及50%乙醇洗脱液，合并回收乙醇后得分离物；（3)分离物再通过超滤膜 纯化，浓缩，干燥得地骨皮活性部位。
[0009] 2.桑白皮活性部位的制备：（1)取桑白皮药材（不去棕色栓皮）适量，用70 %乙 醇提取2次；（2)将乙醇提取物经过AB-8大孔树脂、聚酰胺色谱柱分离，得纯化物，干燥，得 到桑白皮活性部位。
[0010] 3.将地骨皮活性部位与桑白皮活性部位按生药量（1 : 1)的比例配合组抗菌镇痛 中药组合物。 toon] 本发明得到的一种抗菌镇痛中药组合物，所含主要活性成分为甜菜碱、东茛菪内 酯和桑根白皮素。采用HPLC法测定三者的含量，总含量大于80%。
[0012] 与现有技术相比，本发明涉及的一种抗菌镇痛中药组合物具有如下优点和显著的 进步：（1)该组合物由纯化的地骨皮活性部位和桑白皮活性部位配比组成，非单一、粗糙的 提取物；（2)此组合物活性成分明确，主要为甜菜碱、东莨菪内酯及桑根白皮素；（3)HPLC法 测定三种活性成分的含量，总含量达到80%以上，纯度较高；（4)该组合物的抗菌镇痛效果 显著提高，均明显高于单一地骨皮或桑白皮的作用。
【具体实施方式】
[0013] 以下为本发明涉及的抗菌镇痛中药组合物的具体制备实例，旨在对本发明的技术 方案作进一步描述，但本发明的保护范围并不局限于这些实施例。凡与本发明思路类同的 改变或替代方法均包括在本发明的保护范围之内。
[0014] 实施例1抗菌镇痛中药组合物的制备
[0015] 1.取地骨皮l〇〇g，先用8倍量水煎煮提取1小时，过滤。药渣再加6倍量水煎煮 提取0. 5小时，过滤，合并2次滤液，浓缩至100ml。
[0016] 2.将上述药渣加6倍量80%乙醇回流提取1小时，过滤。药渣再加4倍量80%乙 醇回流提取〇. 5小时，过滤。合并2次滤液，回收溶剂，浓缩至100ml。
[0017] 3.将上述水提及醇提液合并，上样于HPD400型大孔树脂上，先用6倍量水洗脱，收 集洗脱液；再依次用6倍量10%乙醇、30 %乙醇、50 %乙醇洗脱，收集50 %乙醇洗脱液，回收 乙醇，与水洗脱液合并，浓缩至l〇〇ml。
[0018] 4.把上述提取液经过超滤膜（10000)纯化，分离液浓缩干燥，得地骨皮活性部位。
[0019] 5.取桑白皮（未去栓皮）100g，用6倍量70%乙醇回流提取1小时，药渣再加4倍 量70%乙醇回流提取1. 5小时。合并2次滤液，浓缩至100ml。
[0020] 6.将上述醇提物经AB-8大孔树脂分离，收集50%、70%乙醇洗脱部位，回收乙醇， 浓缩至l〇〇ml。
[0021] 7.将上述浓缩液上于聚酰胺（300g)色谱柱，收集6倍量70%乙醇洗脱液，回收浓 缩，干燥，得桑白皮活性部位。
[0022] 8.将上述地骨皮活性部位及桑白皮活性部位混合均匀，即得抗菌镇痛中药组合 物。用HPLC法测定组合物中活性成分甜菜碱、东莨菪内酯和桑根白皮素含量，总含量大于 80%。
[0023] 实施例2抗菌镇痛中药组合物的制备
[0024] 1.取地骨皮500g，先用8倍量水煎煮提取1小时，过滤。药渣再加6倍量水煎煮 提取0. 5小时，过滤，合并2次滤液，浓缩至500ml。
[0025] 2.将上述药渣加6倍量80%乙醇回流提取1小时，过滤。药渣再加4倍量80%乙 醇回流提取〇. 5小时，过滤。合并2次滤液，回收溶剂，浓缩至500ml。
[0026] 3.将上述水提及醇提液合并，上样于HPD400型大孔树脂上，先用6倍量水洗脱，收 集洗脱液；再依次用6倍量10%乙醇、30 %乙醇、50 %乙醇洗脱，收集50 %乙醇洗脱液，回收 乙醇，与水洗脱液合并，浓缩至500ml。
[0027] 4.把上述提取液经过超滤膜（10000)纯化，分离液浓缩干燥，得地骨皮活性部位。
[0028] 5.取桑白皮（未去栓皮）500g，用6倍量70%乙醇回流提取1小时，药渣再加4倍 量70%乙醇回流提取1. 5小时。合并2次滤液，浓缩至500ml。
[0029] 6.将上述醇提物经AB-8大孔树脂分离，收集50%、70%乙醇洗脱部位，回收乙醇， 浓缩至500ml。
[0030] 7.将上述浓缩液上于聚酰胺（1500g)色谱柱，收集6倍量70%乙醇洗脱液，回收 浓缩，干燥，得桑白皮活性部位。
[0031] 8.将上述地骨皮活性部位及桑白皮活性部位混合均匀，即得抗菌镇痛中药组合 物。用HPLC法测定组合物中活性成分甜菜碱、东莨菪内酯和桑根白皮素含量，总含量大于 80%。
[0032] 实验研究1.HPLC法测定中甜菜碱含量的含量
[0033] (1)色谱条件色谱柱Hypersil BDS C18柱（4· 6X 250mm，5 μ m)。流动相为甲 醇-50mmolNaH2P04 (2 : 98, ρΗ4· 45)，柱温 30°C，流速 0· 6ml/min，检测波长 192nm，进样量 10 μ 1。
[0034] (2)对照品对照品溶液的配制称取10. 79mg甜菜碱对照品，以水定容至10ml得 1. 079mg/ml的对照品储备液。取0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1. 6ml储备液分别以水定容至2ml。得 浓度分别为 〇· 〇5395、0· 1079、0· 2158、0· 4316、0· 8632mg/ml。得回归方程为：y = 4X 106x(r =0. 9994) 〇
[0035] (3)样品溶液的制备取组合物约10mg，以水定溶于100ml容量瓶中，摇勻，过 0. 45 μ m微孔滤膜，进样10 μ 1测定。结果组合物中甜菜碱的含量为63. 28%。
[0036] 2. HPLC法测定地骨皮有效部位中东莨菪内酯的含量
[0037] (1)色谱条件 DIKMA Spursil C18 色谱柱（4· 6Χ 250_，5 μ m),流动相为甲 醇-0.2%磷酸水（1 : 1)，流速0.8ml/min，柱温25°C，检测波长345nm，进样量10μ1。
[0038] (2)对照品溶液的制备精密称取东莨菪内酯对照品2. 26mg，用甲醇溶解定容至 10ml，制成对照品储备液，浓度为0. 226mg/ml。
[0039] (3)供试品溶液的制备精密称取组合物适量，用甲醇溶解定容至4mg/ml，超声溶 解，0. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
[0040] (4)线性关系考察精密吸取对照品储备液0· 05,0· 2,0· l，2ml置于10ml容量瓶 中，加甲醇至刻度，得系列标准溶液，用0. 45 μ m微孔滤膜过滤，分别进样10 μ 1。以标准溶 液浓度⑴为横坐标，色谱峰面积（Υ)为纵坐标绘制标准曲线，得东莨菪内酯回归方程Υ = 52018X(r = 0. 9999) 〇
[0041] (5)样品测定结果组合物中东莨菪内酯的含量为8. 35%，而地骨皮药材中东莨 菪内酯含量仅为〇. 0021%，含量得到大幅度提高。
[0042] 3. HPLC法测定组合物中桑根白皮素的含量
[0043] (1)色谱条件色谱柱Angelent C18(4. 6mmX 250mm，5 μ m)。流动相为乙腈-水 (60 : 40)，柱温 30°C，流速 l.Oml/min，检测波长 270nm，进样量 10μ1。
[0044] (2)对照品对照品溶液的配制取桑根白皮素对照品适量，用甲醇配制成0.5mg/ ml的对照品溶液。分别以甲醇制成含桑根白皮素0. 05,0. 1，0. 15,0. 2,0. 25,0. 5mg/ml的对 照品溶液按色谱条件测定，得回归方程为y = 21. 5+2. 7X 103x(r = 0. 9997)。
[0045] (3)样品溶液的制备取组合物约10mg，以水定溶于25ml容量瓶中，摇匀，过 0. 45 μ m微孔滤膜，进样10 μ 1测定。结果组合物中桑根白皮素的含量为11. 74%。
[0046] 3.组合物体外抗菌试验
[0047] 1.材料与方法
[0048] 1. 1实验细菌：选择3种常见致病菌：变形链球菌（25175)、牙龈卟啉单胞菌 (33277)、金黄色葡萄球菌（25923)，中国药品生物制品检定所。
[0049] 1. 2采用经典的琼脂二倍稀释法，测定检测样品对细菌的MIC5(I和MIC9(I。除金黄色 葡萄球菌选用MH琼脂培养基、在有氧条件的普通孵育箱进行常规培养18h外，另2种厌氧 菌选用BHI-S琼脂培养基，在37°C、80% N2、20% C02厌氧孵育箱中培养48h。
[0050] 1.3样品液的配制称取组合物干粉10mg，用50%乙醇定容于10ml容量瓶中，即 为地骨皮样品原液。将样品原液用BHI-S液体培养基进行二倍系列稀释，稀释倍数分别为 1 : 2、1 : 4、1 : 8、1 : 16、1 : 32、1 : 64、1 : 128,药物浓度依次为 0.5、0.25、0.125、 0.0625、0.0313、0. 0156、0. 0078mg/mL。
[0051] 1. 4最低抑菌浓度MIC值的测定采用经典的琼脂稀释法，按抗微生物药物敏感性 试验标准操作规程测定各试验药物对试验菌株的最低抑菌浓度（MIC)。受试样品稀释至 所需最高浓度，保留2mL药液，于无菌平皿内加入lmL药液，剩下的lmL药液中加入lmL无 菌双蒸水进行对倍稀释，如此方法可将药液进行系列二倍稀释。无菌平皿中再加入融化的 50°C MH培养基14mL，混匀，待冷却晾干后备用。用多点接种仪接种细菌，需氧菌的接种菌量 约为106CFU/mL，厌氧菌的接种菌量约为10 8CFU/mL，盖上皿盖。需氧菌置于37°C培养箱内 培养24h，观察记录结果：厌氧菌置于20% C02环境，于37°C培养箱内培养48h，观察记录结 果。以平皿内未见细菌生长的药物最低浓度判为最低抑菌浓度（MIC值）。
[0052] 1. 5最低杀菌浓度（MBC)的测定经体外抑菌试验得出药物对各个菌株相应MIC值 后，将MIC值以上浓度的药液与试验菌株用上述相同方法再次进行试验，培养后观察，无细 菌生长的最低药物浓度为最低杀菌浓度。
[0053] 2.结果不同样品对实验菌的抗菌活性，见下表1。
[0054] 表1中药组合物对3种细菌的抗菌活性测定结果
[0055]
【权利要求】
1. 一种具有抗菌、镇痛功效的中药组合物，其特征在于：该组合物是由地骨皮纯化活 性部位与桑白皮纯化活性部位配合组成，重量份数配比按单味生药量为（1 : 1)。
2. 根据权利要求1所述的一种中药组合物，其制备方法的特征在于：（1)取地骨皮药材 适量，依次用水提法、醇提法得到提取物；提取物再用PHD400型大孔树脂分离，分别收集水 洗脱液及50%乙醇洗脱液，合并，回收，浓缩，得分离物；分离物再经超滤膜（10000)过滤纯 化，浓缩，干燥得地骨皮活性部位。（2)取桑白皮药材（未去栓皮）适量，用70%乙醇回流 提取得醇取物：将醇物先后用AB-8大孔树脂、聚酰胺色谱柱分离纯化，分别收集50%、70% 乙醇洗脱部份，回收溶剂，合并，浓缩干燥，得桑白皮活性部位。（3)将上述地骨皮活性部位 与桑白皮活性部位按生药重量配比（1 : 1)混合均匀，即得抗菌镇痛中药组合物。
3. 根据权利要求2所得的中药组合物，经HPLC法检测，主含活性成分甜菜碱、东茛菪内 酯及桑根白皮素，三者总含量大于80 %。
4. 根据权利要求1所述的一种中药组合物，其特征是，该组合物可抑制和杀灭常见细 菌，并具有显著的镇痛作用，效果明显高于单味药。该组合物可应用于防治细菌感染、各类 疼痛及炎症的药物制剂中，也包括在牙膏、漱口水及口香糖等保健用品中的使用。
【文档编号】A61Q11/00GK104147240SQ201410333115
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年7月10日 优先权日:2014年7月10日
【发明者】皮文霞, 李祥, 邱蓉丽, 周盈 申请人:南京中医药大学
文档序号 :
【 1452999 】
技术研发人员：皮文霞,李祥,邱蓉丽,周盈
技术所有人：南京中医药大学
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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