一种猪精液冷冻保存液及提高猪精液冷冻保存品质的方法

本发明涉及生物，具体涉及一种猪精液冷冻保存液及提高猪精液冷冻保存品质的方法。

背景技术：

1、近年来，全球对食品和动物产品需求的变化要求开发育种策略，以在保持遗传多样性的同时最大化遗传改良。可以通过使用不同的繁殖群来保护遗传多样性，但是，它们的维护成本可能很高，近交成为主要问题，需要其他方法以合理和经济的方式保存宝贵的遗传资源。而冷冻保存精液技术能够长期体外保存种质资源，而且也有效地保留了优秀种公畜的种用经济价值。此外，这项服务技术不仅在猪的遗传改良和品种选育中发挥着关键作用，还为国际间种质资源的交流与合作、以及濒危物种的保护提供了重要支持

2、冷冻保存技术是实现动物种质资源离体保护的关键技术，能够将优良种畜的精液在体外长期保存，使精液的使用突破种畜生命周期、空间和时间的限制，从而高效的利用优秀种公畜的遗传资源。冷冻保存效果会受到冷冻降温平衡时长、冷冻稀释液种类、抗冻剂类型、精子密度、气候温差变化等多方面因素的影响，且目前猪精液冷冻保存技术仍不够完善，存在环境应激引起精子生理状况改变，导致精子结构损伤，从而影响冻融后精液的质量和受精能力。没食子酸甲酯作为天然抗氧化剂，具有强大的抗氧化能力，可以有效防止冷冻过程中造成的氧化损伤，并发挥其对细胞功能的保护作用。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种猪精液冷冻保存液。

2、本发明的另一目的在于，提供上述猪精液冷冻保存液的应用。

3、本发明的再一目的在于，提供一种提高猪精液冷冻保存品质的方法。

4、本发明的目的通过下述技术方案实现：

5、一种猪精液冷冻保存液，包括冷冻保护i液和冷冻保护ii液。

6、所述的冷冻保护i液的制备方法包括如下步骤：

7、将鸡蛋卵黄与tcg溶液混合，离心，取上清，即得冷冻保护i液。

8、所述的冷冻保护ii液的制备方法包括如下步骤：

9、将鸡蛋卵黄与tcg溶液混合，离心，取上清，加入甘油和氨基-钠-十二烷基硫酸脂，即得到冷冻保护ii液。

10、所述的tcg溶液的配方为每100ml含葡萄糖0.825g、柠檬酸1.11g、tris1.815g、海藻糖3.5297g、青霉素和链霉素各10万iu，ph 7.2。

11、所述的鸡蛋卵黄与tcg溶液的体积比为1：2～10；优选为1：4。

12、所述的离心的条件为1000～3000g，10～20min；优选为2000g，12min。

13、所述的甘油的加入量为以质量计的终浓度1～5％；优选为3％。

14、所述的氨基-钠-十二烷基硫酸脂的加入量为以质量计的终浓度0.5～2％；优选为1％。

15、优选的，所述的冷冻保护i液中还加入了没食子酸甲酯(mg)，更优选的，没食子酸甲酯的浓度为10～200μm。

16、上述猪精液冷冻保存液在低温保存猪精液中的应用。

17、一种提高猪精液冷冻保存品质的方法，包括如下步骤：

18、(1)将收集的猪精液稀释，离心得到沉淀，加入上述冷冻保存i液，得到重悬后的精液；

19、(2)将重悬的猪精液降温预冷，加入冷冻保存ii液得到精液稀释液，冷冻保存。

20、步骤(1)所述的重悬后的精液中精子浓度为5～20亿/ml；优选为10亿/ml。

21、步骤(1)所述的重悬后的精液还加入了没食子酸甲酯，浓度为20～100μm；优选为40μm。

22、步骤(2)所述的冷冻保存ii液的体积与重悬后的精液体积相同。

23、步骤(2)所述的降温为降低至4℃；优选为以0.14℃/min的速率从17℃降至4℃。

24、步骤(2)所述的冷冻保存为置于液氮保存。

25、步骤(2)所述的冷冻保存的时间为1～28d。

26、本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

27、(1)本发明提供一种可以提高猪精液冷冻保存品质的精液稀释液，即通过添加mg来提高动物精液保存品质。本发明提供的精液稀释液能够显著提高精液冷冻保存活性，延长精子体外保存时间；同时，冷冻解冻后精子活力与对照组相比能提高10％左右。

28、(2)本发明操作简便，应用成本低，效果显著，对猪不产生任何有害影响。可以为猪精液保存提供一定的数据支撑，在猪精液保存及相关的胚胎移植产业(人工授精技术)和胚胎工程中广泛应用，具有广阔的市场前景。

1.一种猪精液冷冻保存液，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的猪精液冷冻保存液，其特征在于：

3.根据权利要求1所述的猪精液冷冻保存液，其特征在于：

4.根据权利要求1所述的猪精液冷冻保存液，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的猪精液冷冻保存液，其特征在于：

6.权利要求1～5任一所述的猪精液冷冻保存液在低温保存猪精液中的应用。

7.一种提高猪精液冷冻保存品质的方法，其特征在于包括如下步骤：

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：