一种山桐子茎段组培快繁的方法及其培养基与流程

本发明属于植物组织培养，尤其涉及一种山桐子茎段组培快繁的方法及其培养基。

背景技术：

1、山桐子(idesia polycarpa maxim.)是大风子科山桐子属的落叶乔木，喜光、不耐阴，在我国主要分布于湖南、四川、河南、贵州、江西、江苏等地。其根系发达、生长速度快，适应性强，枝叶繁茂，果实红色，可以作为优良的速生用材树种和观赏树种；其果实和种子富含油脂，亚油酸含量高达60％以上，可以用来生产食用油、生物柴油、润滑剂、油漆和涂料，其副产物可以用作饲料、生物肥、化妆品的原料，开发利用前景广阔。山桐子作为雌雄异株植物，其优良雌株的繁育与推广对于整个产业的发展至关重要。由于山桐子种质资源存在差异，利用种子繁殖虽然简便，但不同来源的种子发芽难度不一致，并且实生苗普遍存在遗传变异较大问题，雌雄鉴定需等到植株成年开花后才能进行，这大大延长了优良雌株的推广周期。因此，对于山桐子的研究，迫切需要一种更为高效、快速的方法来优良雌株繁育，而无性繁殖是解决这一问题的重要途径之一。

2、目前关于山桐子的无性繁殖已有诸多研究，但嫁接和扦插等方法仍无法在短时间内实现大量优良雌株的扩繁。植物组织培养技术可作为一种快速诱导无菌苗的方法，但山桐子雌株遗传变异大、果实产油率不稳定，使得已报道的山桐子组培体系难以普遍适用，限制了其规模化应用和推广。因此，若能以山桐子优良种质雌株为材料，建立一种高效稳定的山桐子优良雌株的快繁体系，对于山桐子的遗传改良、新品种培育以及推动其在油料作物领域的发展与应用具有至关重要的意义。这不仅对山桐子的遗传改良和新品种培育具有深远影响，还将极大地推动其在油料作物领域的发展与应用。为此提出一种山桐子茎段组培快繁的方法及其培养基。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种山桐子茎段组培快繁的方法及其培养基，旨在解决上述背景技术中提出的问题。

2、为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、一种山桐子茎段组培快繁的培养基，所述培养基包括分化诱导培养基和生根培养基；

4、所述分化诱导培养基配方为：

5、2.08g/l khso4、0.46g/l(nh4)2so4、0.15g/l cacl2、0.15g/l nah2po4、1.96g/l ca(no3)2·4h2o、0.15g/l mgso4·7h2o、0.38g/l mnso4·h2o、0.02g/lznso4·7h2o、0.03g/lcacl2·2h2o、0.04g/l ca3(po4)2、0.048g/l h3bo3、0.016g/lki、0.0039g/l na2mo4·2h2o、0.001g/l nh4hco3、0.025mg/l cuso4、0.02mg/lcocl2·6h2o、0.018mg/l k2hpo4·3h2o、37.25mg/l na2-edta、0.5mg/l烟酸、1.0mg/l维生素b1、0.5mg/l维生素b6、2.0mg/l甘氨酸、0.01mg/l赤霉素、100mg/l肌醇、27.85mg/l feso4·7h2o、0.015mg/l na2-c、0.1-1.5mg/l6-苄氨基嘌呤、0.1-1.5mg/l吲哚丁酸、0.1-1.0mg/l激动素、20-30g/l蔗糖、6-7g/l琼脂和蒸馏水；

6、所述生根培养基配方为：

7、0.048g/l cacl2·2h2o、0.278g/l ca(no3)2·4h2o、0.495g/l k2so4、0.185g/lmgso4·7h2o、0.2g/l nh4no3、0.085g/l kh2po4、22.3mg/l mnso4·4h2o、8.6mg/l znso4·7h2o、6.2mg/l h3bo3、0.25mg/l namoo4·2h2o、0.025mg/lcuso4·5h2o、0.5mg/l烟酸、1.0mg/l维生素b1、2.0mg/l甘氨酸、0.5mg/l维生素b6、100mg/l肌醇、27.8mg/l feso4·7h2o、37.3mg/l na2-edta、0.5mg/l萘乙酸、0.1-1.0mg/l吲哚丁酸、20g/l蔗糖、6g/l琼脂和蒸馏水。

8、一种山桐子茎段组培快繁的方法，包括以下步骤：

9、步骤1、培养基的配制和灭菌：配制含有6-苄氨基嘌呤、吲哚丁酸、激动素和wpm培养基的培养基，将ph值调至5.8-6.0，在121℃的灭菌锅中灭菌20min后待用；

10、步骤2、选嫩茎段和嫩茎段预处理：挑选山桐子雌株树的顶部嫩茎段，将嫩茎段用蒸馏水清洗3次；

11、步骤3、嫩茎段消毒与接种：将步骤2得到的嫩茎段消毒，然后接种到含有步骤1配制培养基的组培瓶中；

12、步骤4、统计成活率：将组培瓶放置在培养室培养，观察其是否成活，统计成活率；

13、步骤5、将最佳诱导条件下诱导的茎段转入含有增殖继代培养基的组培瓶中进行增殖继代培养，然后将增殖芽转入含有生根培养基的组培瓶中进行生根培养，统计嫩茎段的增殖系数和生根率；

14、所述增殖继代培养基的组成为：1.65g/l硝酸铵+0.44g/l氯化钙+0.37g/l硫酸镁+0.17g/l磷酸钾+0.062g/l硼酸+0.22g/l硫酸锰+0.27g/l硫酸亚铁+0.025g/l钼酸钠+0.002g/l甘氨酸+2.0-2.5mg/l 6-苄氨基嘌呤+0.5mg/l吲哚丁酸+0.5-2.0mg/l激动素+20-30mg/l蔗糖+6-7mg/l琼脂。

15、进一步的，所述步骤1中，培养基的组成为：wpm培养基+0.1-1.0mg/l 6-苄氨基嘌呤+0.1-1.0mg/l吲哚丁酸+0.1-1.0mg/l激动素。

16、进一步的，所述步骤3中，嫩茎段消毒步骤在超净工作台中进行，具体操作为：先用75％的酒精消毒30s，无菌水冲洗3次，再用0.1％的氯化汞消毒6min，无菌水冲洗3次，然后将消毒后的嫩茎段放置在灭菌滤纸上吸干嫩茎段表面水分。

17、进一步的，所述步骤3中，每个组培瓶中接种1个消毒后的嫩茎段。

18、进一步的，所述步骤4中，培养室的温度为25±2℃，湿度为50-70％，培养7-14天后统计成活率。

19、进一步的，所述步骤5中，培养室的温度为25±2℃，湿度为50-70％，培养21-35天。

20、进一步的，所述步骤5中，进行增殖继代培养时，每个组培瓶中接种3个茎尖；进行生根培养时，每个组培瓶中接种3个增殖芽。

21、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

22、1、本发明所提供的用于获得山桐子再生植株的培养基，可以针对优良雌性植株进行繁育，快速获得优良雌性苗木，缩短育苗时间，降低成本，顶芽分化诱导成活率高达80％以上，芽苗增殖系数为3-5、生根率可达95％以上。

23、2、本发明首次提出了将0.1-1.0mg/l 6-苄氨基嘌呤(6-ba)、0.1-1.0mg/l吲哚丁酸(iba)和0.1-1.0mg/l激动素(kt)加入wpm培养基，可促进山桐子组培苗成功，解决了鉴定山桐子种子苗雌雄株的痛点。