一种纯蛇粉的鉴定分析方法
【专利摘要】本发明公开了一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类。该方法利用液相色谱测定分析可快速简便的区分纯蛇粉种类，稳定性高，重现性好。
【专利说明】一种纯蛇粉的鉴定分析方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及中药化学分析方法，特别涉及一种纯蛇粉的鉴定分析方法。
【背景技术】
[0002]近几年来蛇类的人工养殖发展迅速，养殖品种和数量都达到了一定的规模，在广西等地已经像养鸡养鸭一般普遍，这使得蛇类这一野生动物的经营利用更为合法。可规模养殖的蛇类品种繁多，其中乌梢蛇、蝮蛇等具有药食两用功能，内含有丰富的由多种氨基酸构成的蛋白质，采用这些蛇种制成的蛇粉或颗粒是具有舒经通络、补充人体营养、改善血液循环、调节免疫功能、活化组织细胞、促进新陈代谢的一款功能性保健食品。基于此，蛇粉或蛇颗粒的需求及产量也越来越大。
[0003]蛇粉市场需求的膨胀，致使越来越多的假冒蛇粉或以次充好的蛇粉广泛流通于市面上。而传统的蛇粉鉴定方法只是通过简单的肉眼辩外观、气味等来辨别是否是蛇粉成分。如80%干燥度的蛇干磨的粉就跟肉松一样；100%干燥的蛇干磨出的粉其中90%是粉和10%是筋、肉丝。蛇粉颜色呈灰白色，闻起来有种蛇身上特别的腥味，其味道不同于其他肉粉和鱼粉。泡于水中60%是不溶于水的，水底部有白色粉末(蛇骨头)硬硬的颗粒状物质。上述方法虽然可在一定程度上鉴定蛇粉，但不能百分之百确定鉴定蛇粉结果正确。如果商家为谋取暴利，利用普通蛇种蛇粉代替药用价值高的昂贵蛇种蛇粉来以次充好，上述方法根本无法辨别出具体是那种蛇制成的蛇粉，也就无法辨别蛇粉的质量好坏。基于目前市场上还未有纯蛇粉种类的鉴定标准及方法，所以亟待制定一种科学有效的纯蛇粉种类鉴别方法。
【发明内容】
[0004]为解决上述技术问题，本发明提供一种纯蛇粉的鉴定分析方法，该方法利用液相色谱测定分析可快速简便的区分纯蛇粉种类，稳定性高，重现性好。
[0005]为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为:一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类，所述蛇粉为蛇粉末或蛇颗粒。
[0006]在其中一个实施例中，所述制备液相色谱分析待测液的具体方法为利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为10-100mg/mL，50-60°C水浴加热25_35min，5000转/min低温离心1min,取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0007]在其中一个实施例中，所述液相色谱测定的具体方法为取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品至少平行测定3次。
[0008]较佳实施情况下，所述液相色谱测定的色谱条件为:色谱柱ODS C184.6mmX250mm ;以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min,经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。
[0009]本发明的有益效果为:本发明提供的一种纯蛇粉的鉴定分析方法中，通过提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征可快速简便的判别出纯蛇粉的种类。该方法重现性、稳定性好，操作方法简便，精密度高。
【专利附图】
【附图说明】
[0010]图1为乌梢蛇粉末的标准HPLC指纹图谱。
[0011]图2为乌梢蛇颗粒的标准HPLC指纹图谱。
[0012]图3为尖吻蝮蛇粉末的标准HPLC指纹图谱。
[0013]图4为尖吻蝮蛇颗粒的标准HPLC指纹图谱。
[0014]图5为实施例1测定得到的待测样品色谱图。
[0015]图6为实施例2测定得到的待测样品色谱图。
【具体实施方式】
[0016]为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的【具体实施方式】做详细说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其他方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0017]一种纯蛇粉的鉴定分析方法，通过提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类，所述蛇粉为蛇粉末或蛇颗粒。
[0018]其中，制备液相色谱分析待测液的具体方法为利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为10-100mg/mL，50-60°C水浴加热25_35min，5000转/min低温离心lOmin，取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0019]优选的，制备液相色谱分析待测液的具体方法为利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为60mg/mL, 55 °C水浴加热30min, 5000转/min低温离心1min,取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0020]上述液相色谱测定的具体方法为取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品至少平行测定3次。
[0021]优选的，液相色谱测定时每个待测液样品平行测定3-6次。
[0022]上述液相色谱测定时优选的色谱条件为:色谱柱ODS C18 4.6mmX 250mm ；以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min，经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。
[0023]上述纯蛇粉的鉴定分析方法中，通过提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征可快速简便的判别出纯蛇粉的种类。该方法重现性、稳定性好，操作方法简便，精密度高。
[0024]以下为具体实施例。
[0025]实施例1:
一种纯蛇粉的鉴定分析方法:1)提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液:利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为10mg/mL，50°C水浴加热25min，5000转/min低温离心1min,取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0026]2)进行液相色谱测定与分析:色谱条件为色谱柱ODS C18 4.6mmX 250mm ；以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min，经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品平行测定6次，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类。
[0027]该实施例测定得到的待测样品色谱图如图5所示，从出峰时间、色谱峰值、峰宽的大小三方面与已知图1-图4所示的乌梢蛇粉末(颗粒)、尖吻蝮蛇粉末(颗粒)标准HPLC指纹图谱进行对比分析，确定待测样品为尖吻蝮蛇颗粒。
[0028]实施例2:
一种纯蛇粉的鉴定分析方法:1)提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液:利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为100mg/mL，60°C水浴加热35min，5000转/min低温离心lOmin，取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0029]2)进行液相色谱测定与分析:色谱条件为色谱柱ODS C18 4.6mmX 250mm ；以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min，经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品平行测定3次，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类。
[0030]该实施例测定得到的待测样品色谱图如图6所示，从出峰时间、色谱峰值、峰宽的大小三方面与已知图1-图4所示的乌梢蛇粉末(颗粒)、尖吻蝮蛇粉末(颗粒)标准HPLC指纹图谱进行对比分析，确定待测样品为乌梢蛇粉末。
[0031]实施例3:
一种纯蛇粉的鉴定分析方法:1)提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液:利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为60mg/mL，55°C水浴加热30min，5000转/min低温离心1min,取上层清夜，过0.22 μ m滤膜，得到液相色谱分析待测液。
[0032]2)进行液相色谱测定与分析:色谱条件为色谱柱ODS C18 4.6mmX 250mm ；以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min，经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品平行测定5次，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类。
[0033]将通过以上实施例测定得到的蛇粉蛋白质色谱图与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类。附图1-4举例分别给出了乌梢蛇粉末、乌梢蛇颗粒、尖吻蝮蛇粉末、尖吻蝮蛇粉颗粒的标准蛋白质HPLC指纹图谱。
[0034]以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
【权利要求】
1.一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，提取纯蛇粉样品中的蛋白质制备液相色谱分析待测液，并进行液相色谱测定与分析，与已有相同色谱条件下各种纯蛇粉样品的标准蛋白质指纹图谱进行对照，根据色谱峰保留时间的特征判别纯蛇粉的种类，所述蛇粉为蛇粉末或蛇颗粒。
2.根据权利要求1所述的一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，所述制备液相色谱分析待测液的具体方法为利用纯水将纯蛇粉稀释至浓度为10-100mg/mL，50-6(TC水浴加热25-35min, 5000转/min低温离心1min,取上层清夜,过0.22 μ m滤膜,得到液相色谱分析待测液。
3.根据权利要求2所述的一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，所述液相色谱测定的具体方法为取液相色谱分析待测液20 μ L注入液相色谱仪，照高效液相色谱法测定，记录色谱图，每个样品至少平行测定3次。
4.根据权利要求1-3所述的任意一种纯蛇粉的鉴定分析方法，其特征在于，所述液相色谱测定的色谱条件为:色谱柱ODS C18 4.6mmX250mm;以0.1%三氟乙酸水溶液+ 0.1%三氟乙酸的70%乙腈溶液为流动相，流速0.6mL/min,经60min复合梯度从O到100%B ;检测器为二极管阵列检测器或紫外检测器；检测波长280nm。
【文档编号】G01N30/02GK104297370SQ201410510067
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年9月29日 优先权日:2014年9月29日
【发明者】郭德志, 郭德刚 申请人:郭德志
文档序号 :
【 6242757 】
技术研发人员：郭德志,郭德刚
技术所有人：郭德志
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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