用于组织损伤的干细胞生长因子疗法的制作方法

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专利名称：用于组织损伤的干细胞生长因子疗法的制作方法
技术领域：
0002本发明涉及用于缺血性组织损伤治疗的人干细胞生长因子(Stem CdlFactor(SCF))的应用。本法明还涉及用于体内表达SCF多肽的载体和输送方法。
背景技术：
0003下面对本发明背景的论述仅仅提供用于帮助读者理解本发明以及并没有承认描述或构成本发明的现有技术。
0004在证明了干细胞在新血管形成中发挥作用，以及在心肌梗塞后心脏功能改善中可能发挥作用之后，干细胞治疗在心脏病学中已经成为研究的活跃领域。干细胞还显示了在治疗缺血性综合症例如冠状动脉疾病、充血性心力衰竭和外周动脉疾病的临床前和临床研究中具有潜力。参见Perin等Circulation 2003 107: r75-r83; Haide等J. Mol, Cell. Cardiol. 2005 38(2): 225; Deschaseaux等，Cardiovascular Res. 2005 65(2): 305; Thompaon等，J. Heart Ling transplant. 2005 24(2): 2501;美国专利申请公布第20060008450号。已经描述了在培养中有效扩增干细胞的方法。参见， Feugier等，J. Hematotherapy and Stem Cell Res. 2002 U: 127-138。
0005在这些疾病模型中，已经假设了干细胞衍生的治疗效果的几种作用机理；1)在骨髓干细胞制备物中存在的内皮前体诱发缺血性组织中的新血管形成并且这种新血管形成增强了血流，其能阻止损伤细胞的凋亡和促进组织修复。参见，Itescu, J. Mol. Med. 2003 8K5):288: Orlic, Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 2001 ^:10344; 2)骨髓衍生的干细胞诱发内源性心肌细胞生成。参见，Yoon等，J.Clin. Invest. 2005115: 326; 3)已经显示哺乳动物细胞能够在干细胞和心肌细胞之间建立纳米管状的"高速通道"，并且细胞质的细胞器和流体被传送到心肌细胞中。参见，Koyanagi, 等，CirculationRes。 2005， 1039-1041;和4)由骨髓衍生的细胞分泌的旁分泌(体液的)因子促进心肌细胞存活。参见，Gnecchi，等，Nat. Med.2005 U:367陽368.
0006已经发现在缺血性疾病例如心肌梗塞后中直接注入CD34+骨髓干细胞或自体同源成肌细胞提高临床效果。但是，细胞的先体外后体内
(离体)处理提出了重大的技术挑战，例如缺乏足够的高效传输方式。参见，Takagi等，Biosci Bioengineer. 2005 22:189-196。另外，细胞产物的制造具有复杂的调控网络，包括维持足够的无菌状态，低温链传输(cold chain transport)，质量控制测试后勤管理，等等(Bosse等，AnnHematol 2005 2^:469-476)。最后，在心脏中注入非心脏细胞可能产生具有生命危险的心律不齐。参见，MenascM等J. Am. Coll. Cardiol. 2003 ii (7): 1078-1083。
0007已经显示在急性的心肌梗塞后施用特定的细胞因子例如SCF和 G-GSF增强心脏功能的恢复。参见，Orlic等，Proc.Natl.Acad.Sci (USA)2001 98 (18) : 10344-10349; Takano等，Current Pharmaceutical Design 2003 2:1121-1127; Ohtsuka等，TheFASEB J.2004 18(7):851-3。施用编码 VEGF165， VEGF189， ANG-1或SDF-1的腺病毒载体，已经被用于增加造血干细胞和内皮祖细胞的血浆水平。Rafii等，Gene Therapy 2002 2:631-641。
0008干细胞生长因子("SCF")为已知为c-kit的酪氨酸激酶受体的配体。参见，Zsebo,Cell 1990， 63(1) 213-24:美国专利第6，218,148号。SCF 诱发原始CD34+骨髓祖细胞的增殖。在小鼠，狗和人类的许多研究中显示SCF/c-kit通路(SCF/c-kitpathway)参与缺血性损伤后的正常修复过程。在C-kit信号传导中具有遗传缺陷的小鼠显示，心肌梗塞后的恢复依靠心
6脏中SCF诱导的c-kit+细胞增殖。参见，Fazel等，"Stem cell factor receptor and cardiac regeneration after myocardial infarction" Am. Heart Assoc. Scientific Sessions 2004, Circulation 2004， 10月26日；110(17增刊)摘要第 2181号；Ayach,等，"c國Kit十BM cells are essential for reducing deteriorating myocardial and heart function post-myocardial infarction"Am. Heart Assoc. Scientific Sessions 2004， Circulation 2004， 10月26日；110 (17增刊)摘要第317号。SCF在心肌梗塞后在犬心脏组织中被诱导。参见，Frangogiannis 等，Circulation 1998巡:687。 SCFmRNA在心肌梗塞后72小时的再输注期间内被诱导。参见，Frangogiannis等1998。从梗塞的心肌产生的SCF在其中存在的巨噬细胞亚群中被发现，并且增加了在缺血部位c-kit+肥大细胞的密度。肥大细胞可以分泌血管因子例如血管内皮生长因子(VEGF)，其促进血管再形成过程。参见，Heissig等，J.Exp. Med .2005 202(6):739-50。 SCF表达被发现在心肌梗塞后的心脏中降低。参见，Wolbaek等， ActaPhysiol Scand 2002 12^:173-181。体外研究显示，SCF基因表达可以被包括TNF-a在内的促炎细胞因子抑制。参见，Andreews等，1992 Blood 祉365A; Langley ， Blood , 1993 M: 656-660。0009美国专利第6，723，561号描述了编码SCF的反转录病毒载体和表达SCF的反转录病毒包装细胞系，和它们在输送外来核酸到对象的干细胞中的应用。
发明概述
0010描述了用于治疗对象损伤的方法。该方法包括输送编码SCF的核酸到对象损伤的部位，其中该核酸被由核酸表达SCF的细胞所吸收。由核酸编码的SCF的形式可能是膜结合形式，可分泌形式或二者都是。在施用并被损伤部位的细胞吸收后，表达的SCF可以在体内将c-kit表达干细胞和 /或肥大细胞募集到损伤部位以使得损害组织修复。
0011应该理解，核酸可以作为可溶的分子被输送——单独的或与蛋白质、脂类和其它物质一起，作为病毒的一部分，或包封在人造颗粒例如脂质体内。但是，核酸不在细胞中输送。但是，应该理解，细胞可以被单独施用并且与核酸的施用分开。这样施用的细胞可以包括干细胞。但是，该方法不必需施用任何这样的细胞。
0012适于该治疗方法的损伤包括缺血性损伤。本文所使用，"缺血性损伤"指供给组织的血液不足所导致的组织损伤，例如由动脉狭窄或封闭引起的。严重的缺血可能导致组织坏死。本文中所使用的缺血性组织的治疗指降低由缺血侵害引起的组织损伤的严重性。
0013优选地，缺血性损伤与心血管系统相关。能够用本文公开方法治疗的牵涉心血管系统的缺血性损伤包括心肌梗塞、缺血性中风、冠状动脉疾病、外周血管疾病(例如。外周动脉疾病)，和充血性心力衰竭。能治疗的其它损伤包括周围神经病，重建外科手术和伤口愈合，和以作为损伤过程一部分的降低的SCF水平为特征的其它疾病。本发明的损伤不包括对象中枢神经系统的神经损伤。
0014由施用的核酸编码的SCF优选地是人SCF。编码的SCF可以是可分泌形式的SCF。优选的分泌形式的SCF包含

图1的氨基酸26-165。编码的SCF还可以是膜结合形式的SCF。优选的膜结合形式的SCF包含图1的氨基酸25-245。还包括施用编码膜结合形式的SCF和分泌形式的SCF的核酸。如本领域熟知，编码每种形式的核酸可以以单一核酸存在或以不同的核酸存在。
0015编码SCF的核酸可以是表达载体的形式，其可以是病毒载体或非病毒载体。优选的病毒载体包括那些从腺病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒、牛乳头瘤病毒，腺相关病毒、慢病毒载体、牛痘病毒或多瘤病毒衍生的病毒载体。
0016通过使用在损伤组织中存在的配体的受体，施用的核酸可以被输送到损伤的部位。使用导向部分进行的病毒载体-介导的转导已经被描述用于许多病毒载体系统，包括慢病毒、逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒和HSV-1扩增子。参见，例如，Takada等，Rev. Med. Virol. 2003 13: 387-398。可选地，或另外，在设备例如可操控导管的帮助下，核酸可以被施用到损伤的部位。在一个实施方式中，导管被用于输送核酸到缺血性心脏组织。在另一个实施方式中，通过植入心壁中的装置，核酸可以被输送到缺血性心脏组织。在又一实施方式中，核酸被输送到冠状动脉
8循环中，其随后将核酸与缺血性心脏组织接触。
0017治疗的方法还包括将干细胞施用到对象。施用的干细胞优选为造血干细胞或间质干细胞。干细胞可以是外源干细胞或内源干细胞，内源干细胞由对象的细胞源离体产生，并且随后返回到对象中。
0018治疗的方法还包括向对象施用一种或多种细胞因子或趋化因子。细胞因子或趋化因子可以与干细胞联合被施用。
附图简述
0019图1为人全长SCF的天然氨基酸序列。
0020图2显示了编码人全长SCF的的核酸序列。在核苷酸位置41 开始的蛋氨酸起始密码子被加强显示，在核苷酸860位置开始的终止密码子TAA被加强显示。
优选实施方式的详述
0021本文提供治疗遭受损伤，例如缺血性损伤的对象的方法，包括向对象施用编码SCF的核酸，其中核酸被输送到损伤的部位并被吸收入表达SCF的细胞中。正如所讨论的，该治疗方法不需要向对象施用细胞。可以相信，依照本发明方法在损伤部位所产生的SCF动员来自体内部位，例如骨髓，表达c-kit的干细胞和/或肥大细胞，其随后回到损伤的部位。细胞可以回到损伤的部位并粘附在其中的基质细胞上，这通过已知被表达在干细胞和基质上的各种受体/配体对中的任意一种进行。这样的受体/ 配体对可以包括SCF/ckit, SDF-1/CXCR4，和VCAM-l/VLA-4。参见， Cottler-Fox,等，Am. Soc. Hematol. Educ. Program Book 2003 San diego calif, 第419页。
0022如本文所描述SCF向损伤部位的靶向输送还可以增强从骨髓动员的在血液中循环的c-kit表达细胞的数目，并且帮助这样的细胞靶向缺血性组织。本文所描述的SCF向损伤部位的靶向输送还可以增加移植细胞的增殖。在将SCF核酸靶向损伤部位后，任意或所有的这些结果可能发生。
0023本文所使用的向"损伤部位"的输送指编码SCF的核酸被输送到在损伤组织中出现的细胞。本领域技术人员知道，向损伤部位的输送不需要所有施用的核酸被输送到损伤组织部位，或没有施用的核酸没有被输送到损伤部位外的细胞。施用的核酸可以被吸收并且被体内损伤组织外
的细胞所表达，只要被损伤组织中的细胞所表达的SCF数量足以募集干细胞到损伤部位并且提供治疗改进。应该理解，本文中对于施用编码SCF核酸的引用不限定于施用裸核酸，而是包括与蛋白质、脂类和其它物质一同施用核酸。因此，施用的核酸可以是病毒载体，其可以被包装在病毒颗粒中，与脂质体结合的核酸和类似物。
0024本文所描述的SCF疗法可以是单独的治疗，可以与标准的医学处理结合，或与其它专用疗法，如施用细胞因子、趋化因子和/或干细胞相
妙A^口口 o
0025在优选的方法中，损伤为与心血管系统相关的缺血性损伤。本文所使用的术语"心血管疾病"指心脏和脉管系统的异常。该术语旨在包括但不限于，肾血管性高血压、充血性心力衰竭、主动脉瘤、髂动脉瘤或股动脉瘤、肺栓塞、心肌梗塞、急性冠状动脉综合症、心绞痛，原发性高血压、心房纤颤、收縮障碍、舒张障碍、心肌炎、动脉硬化症、房性心动过速、心室纤颤、心内膜炎和外周血管疾病。由缺血导致的心血管疾病例如冠状动脉疾病、充血性心力衰竭和外周动脉疾病特别地适合使用本发明的方法治疗。依照本文的方法，心血管系统损伤——例如包括心脏或外周部位例如腿的损伤——的治疗可以通过将编码SCF的核酸输送到损伤部位的方法而完成。
0026如本文所用，"干细胞生长因子"或"SCF，或"SCF多肽"指天然存在的SCF (例如天然人SCF)以及非天然存在的(即不同于天然存在的)多肽，其具有与天然存在的干细胞生长因子足够相同的氨基酸序列和糖基化作用，以便保留天然存在的干细胞生长因子的至少一种生物活性。SCF的生物活性包括刺激早期造血祖细胞的生长，其能成熟为红细胞类、巨核细胞、粒细胞、淋巴细胞和巨噬细胞。在施用SCF后，SCF还具有增加动物体内髓系和淋巴系造血细胞数目的功能。干细胞的特色性特征之一为它们分化成骨髓的和淋巴细胞二者的能力。参见，Spangrude等，Science 1988 241:58-62。
0027SCF多肽可以是全长天然多肽或该序列的变体。参见，例如Martin,FH. Cell, 1990, 63,203-211;美国专利第6,218,148号。SCF多肽还可以包括SCF多肽的截短的或分泌的形式，(例如，包含细外结构域序列的可溶性形式)，变体形式(例如，可选地剪接形式)和SCF多肽的等位基因变体。
0028全长天然SCF多肽作为273个氨基酸的前体被产生，其包括作为信号序列的残基1-25，作为胞外结构域的残基26-214位，作为潜在的跨膜的结构域的残基215-237和作为潜在的细胞质结构域的残基238-273。参见，Swiss-Prot登录号P21583或图l。编码全长天然人SCF的核苷酸序列在图2中被显示为nt位置41-862(还可以参见，GenBank登记号BC074725)。编码SCF的剪接变体的核酸序列在GenBank中在登记号NM 000899和NM003994.2下发现。因此，人天然SCF表示为从Swiss-Prot登录号P21583或图l的位置26-273的248个氨基酸。较短形式的人天然SCF包括表示为Swiss-Prot登录号P21583或图l的位置26-245的膜结合形式，以及可溶性形式表现为Swiss-Prot登录号P21583或图l的位置26-165。
0029如本文所使用的，"可溶性的SCF，或"可分泌的SCF"指具有关于c-kit的生物活性但缺少功能性跨膜结构域的SCF形式。缺少功能性跨膜结构域的分泌形式的SCF缺少Swiss-Prot登录号P21583或图1的序列238-273的全部或几乎全部。"功能性跨膜结构域"为这样的结构域，其当被包含在蛋白质中时，保留在产生蛋白质的细胞的质膜中的蛋白质。可溶性或可分泌SCF可以被保持在未添加去污剂的水溶液中。
0030本文所使用的SCF包括SCF多肽的变体("变体SCF多肽")，其指代"活性"的SCF多肽，其中活性如本文所定义，以及与天然人SCF多肽序列具有至少大约95%氨基酸序列同一性。这样的SCF多肽变体包括，例如，其中在N-或C-未端或在序列中一个或多个氨基酸残基被加入、置换或剔除的SCF多肽。通常地，变体SCF多肽将与所描述的天然氨基酸序列具有至少约95%的氨基酸序列同一性，更优选地具有至少约95%的序列同一性，％%、 97%、 98%、 99%或大于99%的序列同一性，含有
ii或不含有信号肽。在美国专利6，759，215或6,207,417中也描述了天然和非天然的SCF多肽。
0031SCF多肽还包括前蛋白(pre-protein)或原蛋白(pro-protein)或
成熟蛋白，包括能够被导向内质网(ER)、分泌囊泡、细胞区室、或胞外空间的多肽或蛋白质，这典型的例如是信号序列导致的，但是，还包括不需要具有信号序列而被释放进入胞外空间的蛋白质。一般地，多肽进行下列加工，例如信号序列的切割、修饰、折叠等，导致产生成熟的形式(参见，例如Alberts等(1994) ， Molecular Biology of The Cell, GarlandPublishing, New York, NY，第557-592页)。如果SCF多肽被释放到胞外空间中，它能进行胞外加工以产生"成熟"的蛋白质。释放进入胞外空间可以通过多种机理，包括例如胞吐作用和蛋白水解切割而发生。0032SCF多肽还可以被"改变"，导致"变异"，以及可以包含氮基酸残基的剔除、插入或置换，其产生沉默变化并且产生功能相等的蛋白质。考虑周全的氨基酸置换可以根据残基的极性、电荷、溶解度、疏水性、亲水性和/或两亲性性质的相似性作出，只要SCF多肽的生物活性或免疫活性被保留。例如，带负电荷的氨基酸可能包括天冬氨酸和谷氨酸，以及带正电荷的氨基酸可能包括赖氨酸和精氨酸。具有相似亲水性值的、拥有不带电荷极性侧链的氨基酸可能包括天冬酰胺和谷氨酰胺；以及丝氨酸和苏氨酸。具有相似亲水性值的、拥有不带电荷侧链的氨基酸可能包括亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸；甘氨酸和丙氨酸；以及苯丙氨酸和酪氨酸。
0033可以用本领域已知的任意方法制备SCF多肽。例如，天然存在的SCF多肽可以被分离、重组产生、合成产生，或用这些方法的任意组合产生。例如，重组产生的SCF多肽形式——包括分泌的多肽，可以使用本文中所描述的技术或在本领域已知的其它技术纯化。参见，Martin FH
;Primary structure and functional expression of rat and human stem cell
factor DNAs. Cell 63:203， 1990。 SCF多肽还可以从天然的、合成的或重组来源纯化，或本领域已知的其它方式纯化，如诸如使用针对SCF或与SCF融合的肽序列产生的抗体而。参见，例如美国专利6,759,215或6,207,417。0034本文所描述的SCF多肽和变体由核酸所编码。编码SCF的多核苷酸序列，通常是SCF多核苷酸变体将与天然SCF核酸序列具有至少大约75%的核酸序列同一性，更优选地至少大约80%的核酸序列同一性，还更优选地至少大约81%的核酸序列同一性，又更优选地至少大约82%的核酸序列同一性，更优选地至少大约83%的核酸序列同一性，更优选地至少大约84%的核酸序列同一性，更优选地至少大约85%的核酸序列同一性，更优选地至少大约86%的核酸序列同一性，更优选地至少大约87%的核酸序列同一性，更优选地至少大约88%的核酸序列同一性，更优选地至少大约89%的核酸序列同一性，更优选地至少大约90%的核酸序列同一性，更优选地至少大约91%的核酸序列同一性，更优选地至少大约92%的核酸序列同一性，更优选地至少大约93%的核酸序列同一性，更优选地至少大约94%的核酸序列同一性，更优选地至少大约95%的核酸序列同一性，更优选地至少大约96%的核酸序列同一性，更优选地至少大约97%的核酸序列同一性，更优选地至少大约98%的核酸序列同一性，更优选地至少大约99%的核酸序列同一性。优选地，变体将与天然多核苷酸序列具有至少大约95%，更优选地至少96%、 97%、 98%、 99%或大于99%的序列同一'性。参见，Martin FH， FH. Primary Structure AndFunctional Expression Of Rat And Human Stem-Cell Factor DNAS Cell,1990, ^!，203-211。本领域技术人员将理解，作为遗传密码子简并性的结果，可以产生大批编码SCF多肽的多核苷酸序列，其中一些与任何已知和天然存在的基因的多核苷酸序列具有最小同源性。因此，编码SCF的核酸考虑多核苷酸序列的每种和全部可能的变异，其可以根据可能的密码子选择通过选择各种组合而产生。这些组合根据运用到天然存在的SCF的多核苷酸序列的标准三联遗传密码子而产生，并且所有这样的变异被认为被具体公开。编码天然的和非天然的SCF多肽的DNA序列在美国专利6,759,215或6,207,417中被描述。
0035编码多核苷酸可以通过合成化学方法被制备。产生之后，合成的序列可以被单独使用或被插入许多可利用的表达载体和细胞系统的任意之中，这通过使用本领域熟知的试剂进行。而且，合成化学方法可以被用于将突变引入编码SCF的序列。
0036编码SCF的多核苷酸可以由多核糖核苷酸或多脱氧核糖核苷酸组成，其可能是未修饰的RNA或DNA或修饰的RNA或DNA。例如，SCF多核苷酸可以由以下组成单链和双链DNA，为单链和双链区域混合物的DNA，单链和双链RNA，为单链和双链区域混合物的RNA，包含DNA和RNA的杂合分子，其可以是单链的，或更典型地，是双链的或单链和双链区域的混合物。此外，编码SCF的多核苷酸可以由包含RNA或DNA或RNA和DNA两者的三链区域组成。SCF多核苷酸还可能包含一个或多个修饰的碱基或出于稳定性或其它原因而修饰的DNA或RNA骨架。"修饰的"碱基包括，例如三甲基化碱基和非常见碱基例如次黄苷。对DNA和RNA可以进行多种修饰；因此，"多核苷酸"包括化学修饰的，酶法修饰的或代谢修饰的形式。
0037本文所使用的术语"相似的"或"相似性"描述了不同的核酸或氨基酸序列之间的关系，其中，序列因序列内一个或多个区段或区域上部分序列同一性或序列相似性而关联。这样的相似氨基酸残基可以在不同的氨基酸序列之间相同，或代表不同序列间的保守氨基酸置换。因此，术语"同一性"描述了氨基酸残基，其在不同氨基酸序列间是相同的。对于本文所鉴定的每个SCF氨基酸序列，氨基酸序列相似性或同一性被定义为在序列比对之后或，如果需要，引入缺口以获得最大的序列相似性或同一性百分比之后，与SCF多肽序列中的氨基酸残基相似或相同的候选序列中的氨基酸残基百分比。对于本文所鉴定的SCF氨基酸序列，"氨基酸序列同一性百分比(％)"被定义为在序列比对之后或，如果需要，引入缺口以获得最大的序列同一性百分比之后，与SCF多肽序列中的氨基酸残基相同的候选序列中的氨基酸残基百分比，并不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分。类似地，对于本文所鉴定的SCF多核苷酸序歹lj，"核酸序列同一性百分比(％)"被定义为在序列比对之后或，如果需要，引入缺口以获得最大的序列同一性百分比之后，与SCF多核苷酸序列中的多核苷酸相同的候选序列中的多核苷酸百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以通过本领技术内的多种方法完成，例如，使用公共可利用的计算机软件例如ALIGN、 ALIGN-2 、 Megalign (DNASTAR)或BLAST(例如，Blast、 Blast-2、 WU-Blast-2)软件和使用用于缺口罚分(gap penalty)等的默认设置。本领域技术人员可以决定用于测量序列比对的合适参数，包括在被比较的全长序列上取得最大比对所需要的任何算法。例如，本文所使用的同一性百分比数值通过使用 WU隱BLAST-2[Altschul.等，Methods in Enzymology 266:460-80 (1996)]而产生。大多数WU-BLAST-2搜索参数被设置为默认值。那些没有被设置为默认值的参数，即可调整的参数，被设为下列值重叠范围(overlap span)=l;重叠分数(overlapfraction^0.125;字阈值(word threshold) (T) =11;以及得分矩阵(scoring matrix) =BLOSUM62。对于本文的目的，氨基酸序列同一性百分数的数值可以通过以下确定(a)通过 WU-BLAST-2确定的，在感兴趣SCF多肽氨基酸序列和感兴趣的比较氨基酸序列(即，感兴趣的SCF多肽与之比较的序列)之间匹配的相同氨基酸残基的数目分别除以(b)感兴趣的SCF多肽的氨基酸残基的总数目。
0038二条核酸序列基本上相同表示为由第一条核酸序列编码的多肽与由第二条核酸序列编码的多肽发生免疫交叉反应，如下面描述。因此，多肽典型地基本上与第二多肽相同，例如，其中两个肽仅仅因保守置换而不同。二条核酸序列基本上相同的其它指示为二个分子在本领域熟知的严格条件下相互杂交。代表性的高严格条件包括低的盐浓度(例如， <4xSSC缓冲液和/或〈2xSSC缓冲液)，非离子去污剂的存在(例如 0.1%SDS)，和/或相对高的温度(例如，〉55。C和/或〉70。C)。
0039在另一个实施方式中，SCF变体多肽由这样的核苷酸分子编码，其能够与编码全长SCF天然多肽的核苷酸序列杂交，优选地在严格的杂交和洗涤的条件下进行。本文所使用的术语"成熟蛋白质"或"成熟多肽" 指在哺乳动物细胞中表达所产生的蛋白质的形式(一种或多种)。通常假设，一旦成长中的蛋白质链通过粗面内质网的转运开始时，由哺乳动物细胞分泌的蛋白质具有信号肽(SP)序列，其从完整的多肽切割下来以产生蛋白质的"成熟的"形式。对分泌蛋白质的切割不常常是一致的，并且可能产生一种以上的成熟蛋白质。分泌的蛋白质的切割部位由全蛋白的一级氨基酸序列决定。
0040本文所使用的术语"载体"指包含完整复制子的非染色体核酸，这样，当例如通过转化过程被置于细胞中时，载体可以被复制。病毒载体包括反转录病毒、腺病毒、疱疹病毒、乳多空病毒或其它修饰的天然存在的病毒。载体还指核酸与允许被细胞吸收的化学品或物质的配制物。在近几年中生物化学和分子生物学的进展已经导致构建重组载体，其中
例如，反转录病毒、腺病毒和质粒被制成分别包含外源RNA或DNA。在具体的例子中，重组载体可以包括异源RNA或DNA。0041输送核酸的载体可以是病毒载体，非病毒载体或物理载体。参见，例如，Rosenberg等，Science, 242:1575-1578 (1988)，和Wolff等， Natl. Acad. Sci. USA86: 901 l掘4 (1989)。讨论用于基因治疗的方法和组合物的最近的综述文献包括Eck等，c& Gz7/^wS 777e 尸/wr附"co/og7.c"/ 5ay/s r/zm^wZ/cj, 第九版，Hardman 等编辑， McGray-Hill，纽约，(1996)，第5章，第77-101页；附/so" C"". /ww""o/. 107 (增干U 1): 31-32 (1997); Wivel等，//emWo/ogv/(9"co/ogy C7/w'" o/ JVoW/z Jwm'ca， T7z簡"，S. L. Eck， ed， 12(3) : 483-501
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0042用于输送核酸的代表性非病毒载体包括裸DNA;与阳离子脂类复合的DNA，单独或与阳离子聚合物组合；阴离子和阳离子脂质体;DNA-
蛋白质复合体和颗粒，包括与阳离子聚合物例如异源多赖氨酸，限定长度的寡肽和聚乙烯亚胺缩合的DNA，在一些情况下包含在脂质体中；以及包含病毒和多赖氨酸-DNA的三重复合体的使用。广泛地研究了体内 DNA-介导的基因转移到多种不同的靶位置。裸DNA可以提供在肌肉中长期的表达。参见，Wolff,等Human Mol. Genet, 1992 h 363-369; Wolff，等，Science, 1990 247， 1465-1468。 DNA-介导的基因转移也在肝脏、心脏、肺、大脑和内皮细胞中被表征。参见，Zhu等，Science, 1993巡 209-211; Nabel等，Science, 19892M: 1342-1344。用于基因转移的DNA 还可以与多种阳离子脂类、多聚阳离子和其它结合物质一起联合使用。参见，Przybylska等，J. Gene Med .2004《85-92; Svahn等J. Gene Med， 2004 g: S36-S44。
0043当核酸被置于与另一核酸序列的功能关系中时，该核酸被"可操纵地连接"。例如，前序列或分泌前导序列的DNA可操纵地与多肽的DNA 连接，如果它被表达为参与多肽分泌的前蛋白话；启动子或增强子可操纵地与编码序列连接，如果它影响序列转录的话；或核糖体结合位点可操纵地与编码序列连接，如果它被放置在帮助翻译的位置。一般地，"可操纵地连接"指DNA序列被功能性地连接并且在一些情况是相邻的例如分泌前导序列，其在阅读框中也是相邻的。但是增强子并不必须是相邻的。在便利的限制性位点通过连接作用完成连接。如果这样的位点不存在，依照传统的实践使用合成的寡核苷酸连接物或接头。
0044用于引入核酸到细胞中的技术随核酸是被体外转移到培养的细胞还是被体内转移到目的宿主的细胞中而变化。适用于将核酸体外转移到哺乳动物细胞中的技术，包括使用脂质体、电穿孔、显微注射、细胞融合、DEAE-葡聚糖、磷酸钙沉淀方法和类似方法。优选的体内基因转移技术包括用病毒(典型地，反转录病毒或腺病毒)载体进行的转染和病毒包衣蛋白质-脂质体介导的转染(Dzau等，7Ve"A 所ofec/wo/ogy 11(5):205-10(1993))。合适的载体可以通过本领域熟知的任何方法构建。参见，例如Sambrook等，Afo/ecw/ar C7o"/wg，丄a6orato^ Afa"wa/，第二版，Cold Spring Harbor Press (1989)和Ausubel等编辑，CWre^ /Votoco/s ,'" Mo/ecw/w Bz'ofogy, John Wiley & Sons,纽约(1987和更新资料)；Moore 等，Ann N Y Acad Sci. 2001 ， 36-45-47。阳离子脂质体，例如 CD-Chol/DOPE脂质体的使用已经被广泛地记载，作为适当的载体，用于通过静脉内注射DNA/阳离子脂质复合体将DNA输送到广大范围的组织中。参见，Caplen等，A^w"Me/.， 1:39-46(1995); Zhu等，Science, 261: 209-211 (1993)。脂质体通过与质膜融合转移基因到靶细胞。成功应用脂质体复合体的例子包括Lesso-Wood等，/fi/m^ Ge"e77^ra/ ;;， 6:395-405 (1995)，禾口 Xu等，Mo/ec由G匿"cs aw/Me励ofe附，63: 103-109 (1998)。
0045核酸可以通过本领域熟知的多种方法中的任意方法被输送到对象的损伤部位。向部位的输送可以通过受体/配体介导的方法来完成，如对细胞表面膜蛋白质或耙细胞具有特异性的抗体，耙细胞上的受体的配体，和类似物。当脂质体被使用时，结合与胞吞作用相关的细胞表面膜蛋白的蛋白可以被用于靶向和/或促进吸收，例如，对特定的细胞类型有营养作用的衣壳蛋白质或其片段，在循环中经历了内在化的蛋白质的抗体，靶向胞内定位和增强胞内半衰期的蛋白质。受体-介导的胞吞作用的技术被描述在，例如Wu等， /腺.C7z缀262(10):4429-32 (1987);禾口 Wagner等，iVoc.〗Vw/. 5W. USA 87(9):3410-4(1990)。对于基因标记和基因治疗方案的综述文献，参见，Anderson, ^^wce 256 (5058): 808-13(1992)。
0046核酸可以在机械装置例如导管的帮助下被输送到对象的损伤部位。例如，当心脏被损坏时，核酸可以被输送到心肌的间质区，如Altaian 等，美国专利公布第20020010462号中所描述。实质上，可操纵导管被推进到心腔室中的位置并且被放置在心壁附近。药物输送导管被推进以穿透心壁和期望体积的具体输送浆或悬浮液(0.05ml到2.0ml)被注入。穿透结构将被脱离，并且药物输送导管在输送导管中被拉回一小段距离。可操纵导管随后被重置，该过程被重复希望的次数。在这个方法中，输送通过导管系统进行，其输送包含用于表达SCF多肽的载体的稳定脂质体制剂。这种方法还被用于靶向编码SCF的核酸到心血管系统的其它区域。
0047Struijker-Boudier等在美国专利公布第20030009145号中所描述
的以微型泵形式和/或以储存物和植入物形式的持续释放输送技术可以被用于输送编码SCF的核酸到心脏和或心血管系统的其它区域。依照本方法，一般地泵被皮下植入在例如胸壁中或臂下，并且与导管相连以输送载体，其中导管的远端被植入到心肌组织中并且在通过缝线固定适当的位置。此外，非聚合储存物可以被注入到组织中以局部地影响载体的持续释放，产生高效的载体局部浓度而无全身性药物输送的不利副作用。非聚合储存物在释放载体一段希望的时间后，被机体缓慢降解，从而不需要去除输送装置。
0048编码SCF的核酸可以在冠状动脉循环中通过直接的心外膜的灌输被输送到损伤的心脏组织。该工作被描述在2006年7月25日提交的名称为"用于基因治疗的腺相关病毒的持久前向性心外膜冠状动脉灌输
(Extended antegrade epicardial coronary infiision of adeno-associated viral for gene therapy)"的美国临时申请序列第60/833,324中。简而言之，核酸，例如，如本文中更详细描述的多核苷酸/病毒载体，通过体内灌输入搏动心脏的冠状动脉循环的血管中而被施用到对象，在具体的血管中进行至少大约三分钟的时间。提供氧合的血到心脏以分布在整个心脏组织的四个主要的冠状动脉(即左冠状动脉主支和右冠状动脉主支，左前降支动脉(left anterior descending artery)和左旋支动脉)中的一个或多个可以被注入核酸，例如注入左冠状动脉和右冠状动脉。输注时间可以是8分钟、10分钟或甚至更长。优选地，对左冠状动脉主支和右冠状主动脉主支使用前向性心外膜注输注。而且还考虑冠状动脉的逆行性输注，或一种或多种前向性和逆行性冠状动脉或静脉输注的组合。输注流速可以从大约0.1 mL/min到10 mL/min之间变化。在优选的实施方式中，输注流速在大约0.2 mL/min到大约6.0 mL/min之间变化，更优选地在大约0.2 mL/min到大约2.5 mL/min之间，更优选地在大约0.2 mL/min到大约2.0 mL/min之间。使用标准的导丝、导管和输注泵进行冠状血管的输注。在优选的实施方式中，输注管经由股动脉在荧光透视的指导下被直接植入冠状动脉中。如本文所用，"冠状循环的血管"、"冠状血管"或"心脏的血管"包括冠状血管上的移植物，例如那些通过旁路手术产生的移植物。如本文所使用，"心外膜的"指位于心脏外部的血管，例如，左或右冠状动脉。值得注意的是，这种方法不需要将冠状循环与体循环隔离或者另外重新循环核酸，或人工限制冠状静脉循环，以便增加冠状循环中的压力或增加核酸的驻留时间。0049编码SCF的核酸可以通过使用V-焦点心脏循环装置将冠状静脉，即冠状静脉循环基本上或完全地与体循环隔离而被输送到心脏组织，所述V-焦点心脏循环装置包括特殊的导管、充氧器和输注泵。该工作和相关的工作被描述在2004年2月26提交的名称为"输送治疗剂到心脏组织的方法(Methods for delivering therapeutic agents to heart tissue)"的美国临时申请60/548,038; 2004年9月24日提交的名称为"隔离心脏循环 (Isolating cardiac circulation)"的美国临时申请60/612,846; 2005年5月31 日提交的名称为"输送到心脏组织中的多核苷酸(Polynucleotide delivery to cardiac tissue)"的美国临时申请60/685,913; 2005年8月25日提交的 PCT/AU2005/000237中。根据这些方法，引入冠状动脉循环中的多核苷酸因此被选择性地输送到心脏组织。多核苷酸可能或可能不从冠状静脉循环再循环到冠状动脉循环中。优选地，多核苷酸被再循环。有利地，冠状静脉循环与体循环基本上隔离使得多核苷酸优选输送到心脏组织，而最小化非心脏组织对多核苷酸的暴露。优选地，通过闭塞冠状窦和体循环之间的流动将冠状静脉循环与体循环隔离。离开冠状静脉循环的任何多核苷酸因此被限制进入体循环(例如，腔静脉或右心房)运送到身体的其它部分。该方法可以包括在冠状窦中使用静脉收集装置(venous collection device)以从心脏组织中排出多核苷酸。静脉收集装置可以包括支撑物以在收集其中的流体期间保持冠状窦的开放。在静脉收集装置和一个或多个冠状动脉之间建立人工的流动通道并且多核苷酸被加入到人工流动通道以输送到心脏。优选地，支撑结构包括二维或三维框架，其以压缩的状态下被输送到冠状窦。当压缩的结构从输送腔释放时，该框架可以扩张以保持冠状窦中的开放性。用于保持其中的流体收集期间冠
状窦的开放性的支撑结构优选地是可经皮输送的。在另一个实施方式中，支撑结构可以包括二个连续的可膨胀区域。当膨胀时，第一个可膨胀区
域被安置为邻接冠状窦口周围的右心房壁的部分。当膨胀时，第二个可膨胀区域被安置为维持冠状窦的开放性，而冠状窦和右心房之间的流动被闭塞。这些球囊区域可以与或不与可压缩的支撑结构例如上面描述的框架一同使用。V-焦点系统可以被用于输送SCF多肽和多核苷酸以治疗缺血性心脏疾病、非缺血性心肌病、外周血管疾病和衰老。
0050已经开发用于输送治疗剂到心脏组织的各种其它方法和装置可以被用于输送编码SCF的核酸到对象的损伤部位。例如，美国专利 5,387,419; 5,931,810; 5，827，216; 5,900,433; 5,681,278和5,634,895和 PCT公开号WO97/16170描述了输送药剂到心脏的各种装置和/或方法，例如，经心包输送(transpericardial delivery)。美国专利5，387，419和 5,797,870也描述了输送药剂到心脏的方法，其通过将药剂与帮助该药剂从装置持续或可控释放的材料混合，或通过将药剂与保持长久的、高的细胞外周药剂浓度的增粘剂混合而进行。
0051核酸定点输送的方法还包括将核酸直接沉淀到动脉壁中。例如，美国专利6,251,418公开了将固体聚合物小丸(pdlet)植入心肌组织中的方法，其中该小丸用药物包被或包含药物。美国专利6,258,119描述了用于插入心壁以便心壁发生跨心肌血管再形成(transmyocardial revascularizatkm)(TMR)的心肌植入物。植入物提供了促进新血管生成的工具，并且具有柔性的伸长主体，其包含腔和从腔穿过柔性的伸长主体的开口。为了将TMR植入物固定在心壁中，TMR植入物包括在一端以整体形成的同轴锚定元件。
0052用于输送编码SCF的核酸的物理方法包括使用无针注射器，例如"基因枪，，装置，在高压下使用液体以输送到间质空间的装置，和通过电穿孔。将编码SCF的核酸施用到不同的组织包括肌肉注射和外周静脉内的注射。
0053编码SCF的核酸可以被制备并心肌内施用，如对于输送编码音猬蛋白(sonic hedgehog)的核酸所描述的，由Kusano等，Nat. Med. 2005 11(11): 1197-204报道。
0054也可以被用于输送核酸到心血管组织损伤部位的熟知的药物输送装置包括机械输注泵或电机输注泵，例如在美国专利4,692,147; 4，360，019; 4,487,603; 4,360,019; 4，725，852，和类似专利中所描述的。渗透驱动泵(例如DUROST渗透泵)描述在美国专利3,760,984; 3,845,770; 3,916,899; 3，923，426; 3,987,790; 3，995，631 ; 3,916,899; 4,016,880;4，036，228; 4,111,202; 4,111,203; 4,203,440; 4,203,442; 4,210,139; 4,327,725; 4,627,850; 4,865,845; 5,057,318; 5,059,423; 5,112,614; 5,137,727; 5,234,692; 5,234,693; 5,728,396; 5，985，305; 5,728,396和 WO97/27840。
0055编码SCF的核酸优选地在缺血性损伤之后尽可能早地施用，以最佳地增强血管再通。
0056对于预防或治疗疾病，活性药剂的合适剂量将取决于待治疗疾病的类型，如上面所定义，疾病的严重性和进程，药剂以预防目的还是或治疗目的施用，之前的治疗，患者的临床历史和对药剂的反应，以及主治医师的判断力。药剂被适当地在一次或一系列治疗中施用给患者。药物组合物的剂量和希望的药品浓度可以随预想的具体用途而变化。合适剂量或给药途径的确定在普通技术人员的技术范围之内。动物实验为人类治疗有效剂量的确定提供了可靠的指导。
0057本文所使用的术语"治疗""处理"和"疗法"指治愈性疗法、预防性疗法和防御性疗法。"防御性疗法"的例子是预防或减轻目标病理状况或疾病。需要治疗的对象包括已经患病的对象或易于患病的对象或疾病待被预防的对象。"慢性(长期)"给药指药剂以持续的方式给予而不是急性的方式，以便在长时间内保持最初的治疗效果(活性)。"间歇"给药不是不间断的连续进行，但在本质上具有周期的治疗。与一种或多种其它治疗剂"联合"给药包括以任何次序同时(共同)和连续给药。
0058依照本方法，编码SCF的核酸可以被施用一次并取得治疗效果。核酸的施用可以根据需要重复一次或多次。
0059如本文所使用的，"治疗上有效的量"是赋予哺乳动物治疗效果所必须的活性药剂(例如SCF多肽(或编码核酸))的最小数量。例如对患病的哺乳动物或易于患病的哺乳动物或预防患病的哺乳动物而言， "治疗上有效的量"是这样的量，其诱导、改善或引起与前述疾病有关的病理症状、疾病进程、生理状况或对患前述疾病的抵抗的改善。
0060如本文所使用，本文所使用的"载体"包括药理学可接受的载体、赋形剂或稳定剂，它们在所使用的剂量和浓度下对被暴露的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，药理学可接受的载体为含水的pH缓冲的溶液。药
理学可接受载体的实例包括缓冲液，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机
酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于大约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA;糖醇，例如甘露醇或山梨(糖)醇；形成盐的抗衡离子例如钠；和/或非离子表面活性剂，例如TWEEN、聚乙二醇(PEG) 和PLURONIC。
0061在本发明的另一个实施方式中，提供了包含可用于治疗上述疾病的材料的制品。该制品包括容器和标签。适合的容器包括，例如，瓶、小瓶、注射器和试管。容器可以由多种材料例如玻璃或塑料制成。容器具有对于治疗疾病有效的组合物并可以具有无菌入口 (例如，容器可以是静脉溶液袋或具有可被皮下注射针刺穿的塞子的小瓶)。组合物中的活性剂典型的为SCF多肽(或编码核酸)。在容器上或与容器相连的标签指明，组合物用于治疗选择的疾病。制品可以进一步包括第二容器，其包括药理学可接受的缓冲液，例如磷酸盐缓冲盐水、Ringer's溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和使用者的立场希望的其它材料，包括其它缓冲液、稀释剂、过滤器、针、注射器和带有使用说明的包装说明书。
0062通过施用编码SCF的核酸治疗本文所描述的缺血性疾病的方法还可以与施用细胞例如干细胞结合。细胞可以在施用核酸之前或期间或之后给予。优选地，细胞在施用核酸后二周之内被施用。
0063施用的细胞对于对象来说可以是外源的并且在体外产生。在另一种方法中，细胞可以由取自对象的组织离体产生，并且随后在治疗期间返回到对象。离体产生干细胞的方法在本领域熟知并且包括美国专利第6，326,198; 6,261,549; 6,093,531; 5,935,565; 5,670,351; 5,670,147; 5,646,043; 5,437,994。这些方法特别地适用于产生造血干细胞。干细胞可以用特定的细胞因子和趋化因子与遗传修饰的细胞一起培养和增殖，如Feugier等，J. Hematotherapy and Stem Cell Res.2002 11:127-138所描述。0064本文所描述的用编码SCF的核酸对缺血性损伤的治疗还包括施用间充质干细胞。这样的干细胞可以被遗传修饰以表达细胞因子例如 SCF，如Faizel等，J Thorac Cardiovasc Surg. 2005 130(5): 1310所描述的。0065本文所描述的用编码SCF的核酸对缺血性损伤的治疗还包括施用一种或多种细胞因子或趋化因子。细胞因子或趋化因子可以作为纯化的蛋白质或纯化蛋白质的药物制剂被施用。细胞因子或趋化因子还可以通过施用编码细胞因子的表达(载体)被施用，因此其可以被对象的细胞吸收并且细胞因子或趋化因子由之表达。蛋白质和编码核酸的组合也可以被施用。二种或多种细胞因子或趋化因子可以被施用或细胞因子和趋化因子二者的组合可以被施用。
0066如本文所使用的，"细胞因子"指几种调节蛋白的任意一种，例如白细胞介素和淋巴因子，它们由免疫系统的细胞释放并且在免疫应答的产生中充当细胞间的介质。本文所使用的"趋化因子"指具有有效的白细胞激活和/或趋化活性的结构相关的糖蛋白家族。它们在长度上为70 到90个氨基酸和分子量为大约8到10kDa 。它们的大部分被分入具有四个半胱氨酸残基的二个亚家族。这些亚家族基于是否二个氨基末端半胱氨酸残留紧密相邻或被一个氨基酸分开。a趋化因子，也称为CXC趋化因子，在第一和第二半胱氨酸残基之间含有单个氨基酸；(3或CC趋化因子具有相邻的半胱氨酸残基。大多数CXC趋化因子对于嗜中性粒细胞是化学引诱物，而CC趋化因子通常吸引单核细胞、淋巴细胞、嗜碱细胞和嗜曙红(嗜酸)细胞。
0067本文所描述的治疗方法中有用的细胞因子和趋化因子包括，例如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子
(GM-CSF)、 SCF、血管内皮细胞生长因子家族成员(VEGF-A到 VEGF-E)、成纤维细胞生长因子(FGF)、促血管生成素-1 (AdAngl)、基质细胞衍生因子l (SDF1)。这些多种多样的多肽可以如本领域熟知的产生并施用，或可以作为编码核酸被引入并在体内表达。参见，Orlic等， Proc. Natl. Acad.Sci (USA) 2001 98 (18): 10344-10349; Takano等，CurrentPharmaceutical Design 2003 9:1121-1127; Ohtsuka等，The FASEB J. 2004 18(7):851-3; Rafii等，Gene Therapy 2002 9:631-641 。这些多肽因子的许多还可以作为商业上批准的药物获得(例如，G-CSF可以作为非格司亭 (filgrastim)或Neupogen (Amgen,Thousand Oaks,力卩禾lj福尼亚)、来格司亭(lenograstim)或Granocyte (Chugai Pharmaceutical Company Ltd.)或聚乙二醇化的非格司亭或Neulasta⑧(Amgen，Thousand Oaks,加利福尼亚) 购买得到。
0068对于本领域技术人员来说很明显的是，对本文公开的发明可以作各种替代和修改，而不脱离本发明的范围和精神。在缺少本文中没有具体公开的任何元素(一种或多种)、限定(一种或多种)的情况下，本文示例性描述的发明可以被适当地实施。所使用的术语和表达作为描述的术语而不是限定，在这些术语和表达的使用中并没有想要排除所显示和描述的特征或其部分的任何等同物，而是应该认识到，各种修改可以在本发明的范围内。因此，应该理解，尽管本发明已经由具体的实施方式和任选的特征描述，对本文中所公开的概念的修改和/或变化可以被本领域技术人员进行，并且这样的修改和/或变化被考虑在本发明的范围之内。
0069此外，在本发明的特征或方面根据马库什组或其它可替代的组描述时，本领域技术人员将认识到，本发明也因此根据马库什组或其它组的任何单个成员或亚组的成员而描述。
0070而且，除非指明相反的情况，在各种数值提供用于实施方式时，其它的实施方式可以通过采用作为范围端点的任意二个不同的值而描述。这样的范围还是在所描述的发明的范围内。
0071说明书中所引用的所有的文献、专利和/或申请都以它们的整体并入作为参考，包括任何表格和图，其程度仿若每一篇文献以其整体单独并入作为参考。
2权利要求
1.一种用于治疗遭受缺血性损伤的对象的方法，该方法包括给所述对象施用编码干细胞生长因子(SCF)的核酸，其中所述核酸被输送到所述损伤的部位，在所述损伤的部位，所述核酸被细胞吸收并且SCF被表达。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述SCF是可分泌形式的SCF。
3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述SCF包括图1中的氨基酸 26-165。
4. 根据权利要求1所述的方法，其中所述SCF是膜结合形式的SCF。
5. 根据权利要求4所述的方法，其中所述SCF包括图1中的氨基酸 25-245。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中所述SCF包括膜结合形式和可分泌形式二者。
7. 根据权利要求1所述的方法，其中所述SCF是人SCF。
8. 根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸是载体。
9. 根据权利要求8所述的方法，其中所述载体是病毒载体。
10. 根据权利要求9所述的方法，其中所述病毒载体被包裹在感染性病毒颗粒中。
11. 根据权利要求9所述的方法，其中所述病毒载体选自腺病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒、牛乳头瘤病毒，腺相关病毒、慢病毒载体、牛痘病毒和多瘤病毒。
12. 根据权利要求9所述的方法，其中所述病毒载体是腺病毒载体或与腺相关病毒载体。
13. 根据权利要求1所述的方法，其中所述损伤与心血管系统有关。
14. 根据权利要求1所述的方法，其中所述损伤与选自下面的疾病相关心肌梗塞.缺血性中风、外周血管疾病和心力衰竭。
15. 根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸使用导管被输送到所述损伤的部位。
16. 根据权利要求1所述的方法，其中所述输送是输送到缺血性心脏组织。
17. 根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸被输送到冠状动脉循环中以便输送到缺血性心脏组织。
18. 根据权利要求1所述的方法，其中，所述核酸使用植入在所述心脏壁中的装置被输送到缺血性心脏组织。
19. 根据权利要求1所述的方法，其中在所述损伤部位的SCF表达将细胞募集到所述部位以实现修复。
20. 根据权利要求1所述的方法，进一歩包括施用一种或多种细胞因子或趋化因子的步骤。
21. 根据权利要求20所述的方法，其中所述细胞因子选自G-CSF和 GM-CSF。
22. 根据权利要求1所述的方法，其中所述对象不被施用细胞。
23. 根据权利要求1所述的方法，进一步包括施用细胞的步骤。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中所述细胞为干细胞。
25. 根据权利要求24所述的方法，其中所述干细胞从取自所述对象的组织中被离体产生。
全文摘要
本发明涉及使用干细胞生长因子(SCF)来治疗例如心血管疾病中的缺血性损伤组织。该方法包括施用编码SCF的核酸，其中核酸被输送到损伤的部位并且被整合到随后表达SCF的细胞中。
文档编号A61K38/19GK101563097SQ200680045846
公开日2009年10月21日申请日期2006年11月13日优先权日2005年11月14日
发明者K·M·热伯申请人:企业合伙人风险资本公司

文档序号 : 【 1127065 】

技术研发人员：K.M.热伯
技术所有人：企业合伙人风险资本公司

备注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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K.M.热伯丨企业合伙人风险资本公司

复合型生长因子护肤品原料及使用该原料的修复护肤品的制作方法采用脂肪来源成体干细胞大量制造生长因子的方法