一种生物支架材料、svf辅助的脂肪组织制备方法
【具体实施方式】
[0019]以下结合实例对本发明技术方案作进一步的详细说明。
[0020]实例1:
步骤一、脂肪组织的纯化
将抽脂获得的40ml脂肪组织1200r/min，21°C离心3min，去除液体部分，得到20ml固态的脂肪颗粒。再将得到的脂肪颗粒去除结缔组织，用组织剪将大块组织剪碎，以Iml注射器去除针头后能正常抽取为宜；
步骤二、脂肪SVF的制备
将上述纯化的脂肪颗粒取出10ml，加1ml生理盐水进行清洗，1200r/min，21 °C离心3min，去除液体部分，得到固态的脂肪颗粒。再加入1ml生理盐水配置的胶原酶溶液(上海乔源生物制药有限公司)，200U/ml,37°C，恒温震荡消化30min，收集消化液，800r/min，21 °C离心5min，去除上清，取细胞沉淀，再加入1ml无菌生理盐水，800r/min，21°C离心5min，再次取细胞沉淀，用Iml生理盐水重悬，在倒置相差显微镜下观察细胞形态，用细胞计数仪进行计数，细胞总数为2.8X 17个。并进行台盼蓝染色，计算出细胞成活率为93%，总成活细胞数为2.6 X 17个； 步骤三、生物支架的选择本实例选取的支架材料为瑞蓝2号透明质酸。
[0021]步骤四、移植材料的混合
将步骤三中的透明质酸与步骤二中SVF用两个5ml注射器去针头连通后的装置混合均匀，再将上述混合物与部分步骤一制备的脂肪颗粒混合均匀，保证混合物中活性脂肪SVF含量为107ml。
[0022]将上述未混合透明质酸和SVF的脂肪颗粒、混合透明质酸和SVF的移植脂肪进行裸鼠皮下移植，每只裸鼠在背部脊椎两侧各注射500ul上述两种移植物，两个月后托颈椎处死裸鼠，剪开背部皮肤，可见单纯脂肪颗粒大部分被吸收(参见附图1A)，含PRF和SVF的移植脂肪形态良好，并有大量新生血管长出(参见附图1B )。将两组脂肪组织取出，制备石蜡切片并进行血管内皮细胞标记物CD31的免疫组织化学染色，单纯脂肪颗粒移植后的切片没有再生血管(参见附图1C)，含PRF和SVF的移植脂肪切片有大量血管生成(参见附图1D，箭头指示部位)。
[0023]实例2:
步骤一、脂肪组织的纯化
将从面部法令纹填充者腹部注射肿胀液后获得的50ml脂肪组织1200r/min，2rC离心3min，去除液体部分，得到25ml固态脂肪颗粒。再将得到的脂肪颗粒去除结缔组织，用组织剪将大块组织剪碎，以Iml注射器去除针头后能正常抽取为宜；
步骤二、脂肪SVF的制备
将上述纯化的脂肪颗粒取出12ml，加12ml生理盐水进行清洗，1200r/min，21 °C离心3min，去除液体部分，得到固态的脂肪颗粒。再加入12ml生理盐水配置的胶原酶溶液(上海乔源生物制药有限公司)，200U/ml,37°C，恒温震荡消化30min，收集消化液，800r/min，21 °C离心5min，去除上清，取细胞沉淀，再加入1ml无菌生理盐水，800r/min，21°C离心5min，再次取细胞沉淀，用Iml生理盐水重悬，在倒置相差显微镜下观察细胞形态，用细胞计数仪进行计数，细胞总数为3.27X 107个。并进行台盼蓝染色，计算出细胞成活率为89%，总成活细胞数为2.91 X 17个；
步骤三、生物支架材料的选择
本实例支架材料为PRF，其制备过程为:抽取面部法令纹填充者血液20ml于普通无菌米血管中，离心机3000r/min，4°C离心15min，置于4°C冰箱冷藏30min，备用；
步骤四、移植材料的混合
将步骤三4°C冷藏的血液取出，去除上层红细胞层和中层血清层，将下层9ml淡黄色PRF凝胶取出，用眼科剪剪成Imm3大小的颗粒，与步骤二中脂肪SVF混合均匀，再将上述混合物与部分步骤一制备的13ml脂肪颗粒混合均匀，保证混合物中活性脂肪SVF含量为2 XlOVml ο
[0024]将上述混合PRF、SVF的移植脂肪进行求美者法令纹填充，填充前可见明显的法令纹(参见附图2A)，单侧进行7ml含PRF、SVF的移植脂肪填充，3个月后，脂肪吸收稳定，法令纹改善效果明显(参见附图2B)。
【主权项】
1.一种生物支架材料、SVF辅助的脂肪组织制备方法及其应用，其特征在于:脂肪移植材料是在无菌条件下，由生物支架、SVF、脂肪颗粒三者均匀混合而成。2.其中，生物支架选自临床用于注射填充的生物材料、脂肪颗粒由抽脂术后脂肪组织纯化而来、SVF是由部分纯化后的脂肪颗粒制备的。3.根据权利要求1所述的一种生物支架材料、SVF辅助的脂肪组织制备方法及其应用，其特征在于，包括以下操作步骤: 步骤一、脂肪组织的纯化 将抽脂获得的脂肪组织1000-2000r/min，21°C离心2_10min，去除液体部分，得到固态的脂肪颗粒。4.再将得到的脂肪颗粒去除结缔组织，用组织剪将大块组织剪碎，以Iml注射器去除针头后能正常抽取为宜； 步骤二、脂肪SVF的制备 将上述纯化的脂肪颗粒取出一半，加等体积生理盐水进行清洗，1000-1500r/min, 21 °C离心3-10min，去除液体部分，得到固态的脂肪颗粒。5.再加入等体积生理盐水配置的胶原酶溶液，200U/ml，37°C，恒温震荡消化30-60min，收集消化液，500_1200r/min，21°C离心5_10min，去除上清，取细胞沉淀，再加入5-10ml生理盐水，500-1500r/min，21°C离心5_10min，再次取细胞沉淀，用1-1Oml生理盐水重悬，获得脂肪SVF。6.在倒置相差显微镜下观察细胞形态，用细胞计数仪进行计数，并进行台盼蓝染色，计算出细胞成活率，并进行总成活细胞数的计算: 总成活细胞数=成活率X细胞总数； 步骤三、生物支架材料的选择 微粒化生物支架材料可以选择已商品化的产品或自行制备，其材质为机体可接受的生物可降解材料或来源于自体成分的纤维支架成分，包括胶原、透明质酸、聚乳酸、羟基磷灰石、富血小板纤维蛋白(PRF)的任一种或是几种的组合，微粒化生物支架材料的粒径为20_1000um ； 步骤四、移植材料混合 将步骤二中SVF与步骤三选择的生物支架材料用l-5ml注射器反复吹吸混合均匀，再将上述混合物与步骤一制备的脂肪颗粒混合均匀，保证混合物中脂肪SVF含量为16-1O7/ml ο7.根据权利要求1所述的一种生物支架材料、SVF辅助的脂肪组织制备方法及其应用，其特征在于，所述移植脂肪材料可用16G或18G针头注射，对受区创伤小，易于愈合，不会留下疤痕。8.根据权利要求1所述的一种生物支架材料、SVF辅助的脂肪组织制备方法及其应用，其特征在于，可用于凹陷畸形的修复(如颞部、颊部凹陷)，面部、胸部美容充填，软组织功能重建等。
【专利摘要】本发明公开了一种生物支架材料、SVF辅助脂肪组织制备方法及其应用。本发明是在无菌条件下，将生物支架材料、纯化脂肪颗粒用医用级胶原酶消化后制备的血管基质成分（stromal vascular fraction,SVF）与纯化脂肪颗粒按照一定比例混合均匀后，制备成填充用脂肪移植物。SVF是脂肪间充质干细胞等多种细胞的混合物，与自体脂肪颗粒混合后进行移植，在体内可以继续发育为成熟的脂肪组织，生物支架材料能为移植脂肪提供支撑，易于移植组织再血管化，提高移植组织的成活率；移植组织适于16G或18G针头注射，便于临床应用，可用于凹陷畸形的修复(如颞部、颊部凹陷)，面部、胸部美容充填，软组织功能重建等；尤其在美容充填中，本发明制备的移植脂肪组织可促进外形恢复、防止液化坏死。
【IPC分类】A61L27/22, A61L27/20, A61L27/36, A61L27/38
【公开号】CN104984399
【申请号】CN201510453583
【发明人】李锐
【申请人】西安芙金细胞科技有限公司
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年7月29日
文档序号 :
【 9267288 】
技术研发人员：李锐
技术所有人：西安芙金细胞科技有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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