包含血浆或血清的用于治疗神经损伤的药物成分的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗神经损伤的药物成分，优选是包含药物有效剂 量的血浆或血清的作为活性成分的用于治疗神经损伤的药物成分。
背景技术：
神经系统分为外周神经系统和中枢神经系统，外周神经系统包括除 了属于中枢神经系统的脑和脊髓以外的所有神经。神经系统还可分为体 神经系统和植物神经系统，其中体神经系统包括颅神经和脊神经，植物 神经系统包括交感神经和副交感神经。单个神经细胞包括细胞体、树突、 和轴突、其中树突用于传递神经冲动到细胞体，轴突将神经冲动导出细 胞体。在轴突的末端，若干个突触末端相连，连接到其它的神经细胞或 靶细胞。轴突包括环绕有雪旺细胞的髓鞘，和郎飞结。
与神经细胞死亡或损伤相关的神经学疾病的典型治疗是通过促进神 经突向外生长而促进神经再生，或者抑制神经细胞死亡。神经再生启动子，迄今为止为人们所知的厂包括神经生长因子(NGF; Levi-Montalcini R. 禾口 Hamburger V., 乂 ￡xp. Zoo/., 123:233, 1953)，脑源性神经营养因子 (BDNF; Leibrock等，iV"/we， JW:W9， WS"，神经营养因子-3 (NT-3; Maisonpierre等 膨，247:1446， 19卯),睫状神经营养因子(CNTF; Lin 等，Sc/e"ce， 246:1023， 19卯)，胰岛素和胰岛素样生长因子(Aizenman等， 肠/" 406:32, 1987; Bothwell, 肠簡c/. 8:225, 1982;Recio-Pinto等，7Vewmsc/.， 6:1211,1986; Near等，/WAS, 89:11716， 1992;Shemer等， / C/zew., 262:7693， 1987; Anderson等，/Tzj^/o/.Scand.， 132:167， 1988; Kanje等，5ra/" 475:254, 1988; Sjoberg和Kanje, L， 485:102, 1989; Nachemson等.，G腳^ Fa"阻，3:309，1990; Re-cio-Pento等，J肠簡c/. 19:312， 1988; Matteson等，Ce〃 5/o/.， 102:1949, 1986; Edbladh等，5r"/" 641:76， 1994),激活素(Schubert等，胸,，344:868, 1990),红紫素(Berman等，Ce〃， 51:135, 1987)，成纤维细胞生长因子(D. Gospodarowicz等，Ce〃 Z)#er.， 19:1, 1986; Baird, A.禾B Bohlen, P.,成纤维细胞生长因子.In:肽生长因子及 其受体1. (eds. Sporn, M.B.禾卩Roberts, A.B.) 369-418. Spring隱Verlag, Berlin, Heidelberg, 1990;禾口 Walter, M.A.等,Lymp/zoAiwe C,A:/we Wes., 12:135， 1993),雌激素(Toran國Allerand等，J. 5VeroW Sfoc/iem. Mo/.历o/,, 56:169, 1996; McEwen, B.S.等，Brain Res. Z)ev.87:91, 1995), 血小板衍生的生长因子(PDGF;美国专利6，506，727)，纤维蛋白降解因子 (如，组织型纤维蛋白溶酶原激活物)，蛋白纤维化抑制剂 (defibrinogenating agents)(例如，蝮蛇清栓酶，尿激酶，链激酶或者抗惊 厥剂；美国专利公开号2003/0219431 Al)等等。已知的抑制细胞死亡的 物质包括血栓调节蛋白同型物(美国专利公布2004/0002446 Al)。众所周知，脑和脊髓的中枢神经没有再生能力。由于此原因，没有方 法能够治疗例如脊髓损伤的创伤，或者例如阿尔茨海默症和帕金森症这 样的的神经退行性疾病。即使有某些研究报导脊髓的神经细胞显示再生能力，这些研究是不完 善的，因为再生反应是短暂的并且轴突死亡的。这种不成熟的反应的原 因尚未找到。在使用如上所述的已知的神经再生促进物质来治疗神经损伤时存在 限制，若干个有限的治疗方法用于治疗脊神经的损伤。直到最近，为了 将继发损伤减小到最低的程度，在脊神经损伤的早期阶段，用于脊神经的药物治疗包括向静脉给予大剂量的类固醇甲基强的松龙(steroid methylprednisolone) (Hall, E.D.，插.7Ve腳/., 59:241, 1993; Bracken, M.B.， / 脸磨，g., 93:175， 2000; Bracken, M.B., Cochrane Database i ev., 2: 2000; Koszdin,等，Anesthesiology, 92:156, 2000)。然而最近的分析数据显 示应当禁止这种药物治疗(Hurlbert, R丄， / A^wmswg., 93:1, 2000; Pointillart等，一《/ C", 38:71， 2000; Lankhorst等，5簡'w L, 859:334, 2000),而其它药物仍处于试验期。近些年，在限制脊神经再生因子的理解和基于这种理解发展的脊神经 成功再生的策略方面取得了显著进步(Ramer, M.S.等，J. A^wras"'. 21:2651, 2001)。基于这些研究，认为Nogo是中枢神经再生的抑制因子 中的一种(Chen， M.S.等，A^化re， 403:434， 2000)。然而，因为敌Nogo的 抑制作用导致轴突仅有部分的再生，而其它再生抑制因子能够存在。通 过MAG (髓磷脂相关的糖蛋白)、肌糖蛋白、神经节苷酯、ephrin、神经 突起生长导向因子(netrin)、轴突导向因子(semaphorin)等等可以举例 说明再生抑制因子。尽管这些因子在脊神经的成功再生中的确执行重要 作用，但在脊神经再生中也应该考虑其它需求。这些需求包括最大化轴 突的增殖支持、在部分损伤中最优化活轴突的功能、引导扩展再生长、 调整适当的持续性、以及最小化有害影响，包括初发伤，炎症和伤口生 成。基于这个考虑，Priestley等人建议损伤的脊神经细胞的再生可通过 刺激和中性粒细胞缠绕在一起的纤维结合蛋白(Priestley, J.V.等，Jowma/ 。/P一油gy -尸鹏、96, 123-133, 2002)。然而，通过上述生长因子的神经再生存在神经细胞再生过程中神经细 胞的某些部分局部有效性的问题，并且由于在生长因子的生产和提纯过 程中花费了大量的资金，这是不经济的。因此本发明对于更有效的神经再生因子的发育作出巨大的努力，结果 发现当具有脊神经损伤的鼠模型通过哺乳动物的血浆或血清处理后，此时神经细胞再生，并且具有再生神经损伤位点具有与其它位点完整的结 构持续性，因而完成本发明。发明内容本发明的目的在于提供一种治疗神经损伤的药物成分，其包括药物有 效剂量的血浆或血清作为活性成分。为了达到上述目的，本发明提供一种治疗神经损伤的药物成分，其包 含药物有效剂量的血浆或血清作为活性成分。根据本发明该成分以优选选自于局部给药的糊剂、溶液、悬浮液和凝 胶组成的组中的任一一种形式存在。同时，所述血浆或血清的含量优选为该成分重量的0.1-99.9wt%。在本发明中，神经损伤优选指外周神经损伤或脊神经损伤。神经损伤 优选指其神经被切断。这种损伤，其切断的神经，优选是已切断的神经 突长度大于10mm的损伤。在本发明中，外周神经损伤优选是选自由糖尿病性神经病变、肢端肥 大症、甲状腺功能减退症、爱滋病、麻风病、莱姆病、系统性红斑狼疮、 类风湿性关节炎、斯耶格伦氏综合征、结节性动脉周围炎、韦格纳氏肉 芽肿病、颅动脉炎和肉样瘤病组成的组中的一种疾病相关的神经机能紊 乱。本发明中的其它特征和实施例由下述详细的说明书和附图解释。
图1显示具有损伤的神经细胞鼠模型的BBB检测的结果。 图2显示具有损伤的神经细胞鼠模型的方格步行检测的结果。 图3为表明鼠模型(A:正常组；B:对照组；禾B C:处理组)的足 迹分析结果的照片。图4显示具有损伤的神经细胞鼠模型的感觉潜伏期的电生理检测的 结果。图5显示对照鼠组和正常鼠组的损伤位点的组织学照片。
具体实施方式
用于此处的术语"脊神经损伤"是指当外力作用于脊髓时发生的所有 损伤。脊神经损伤包括病理生理术语中的原发损伤和继发损伤。脊神经 的原发损伤是指由撞击发生导致的身体破裂的组织损伤。人体的原发损 伤是由机械外力如撞击、压迫、牵引和撕裂、切割伤等等导致的。根据 最常见的机理，原发损伤是由于和连续压迫一起作用的撞击所导致，并 主要归因于压縮性骨折、骨折脱位、枪伤和髓间盘破裂。脊神经的继发损伤是由从原发损伤的组织中释放出的生化介质引发 的。由继发损伤产生的生化物质引起病理生理信号过程而逐渐地损伤组 织，从而导致细胞死亡。原发损伤组织释放的其它生化物质使组织破坏 的恶性循环继续。这种继发的病理生理病变包括能引起细胞膜损伤、血 管损伤、炎症、电解质紊乱、改变的能量代谢、和氧化应激的各种生化 变化。神经损伤的程度可由几种不同的方式评估。这些方法包括Frankel分 类系统、ASIA (美国脊椎损伤协会)分类系统，耶鲁分类系统、运动指 数量表、改良的巴塞尔指数(Wells, J.D.禾B Nicosia, S., ■/CoW 7kfed, 18:33， 1994)等等。患者可分为完全或不完全脊髓损伤。完全的脊髓 损伤可指在跌打损伤之后24小时之内肌强度和肌感觉完全丧失、或肛门 括约肌收縮、骶骨的感觉丧失和球海绵体反射丧失的情况。不完全的脊 髓损伤是指在损伤位点以下至少保留有部分运动和感觉功能。不完全的 脊髓损伤可分为脊髓前角综合征、脊髓后索综合征、脊髓中央损伤综合 征、外侧索综合征、神经根综合征等等。形成外伤性脊髓损伤的动物模型有利地用于建立病理生理机制和评估疗效(Anderson， T.E.和Strokes, B.T., / A^,/應ma， 9:S135, 1992; Blight, A.R.， C加ra/7Ven/麵一em r腦mo, 2:299, 1985; Blight, A.R.等, McGraw Hill:纽约，1367-1379， 1966)。这些动物模型包括重量下降模型 (Kuhn, P丄.和Wrathall, J.R., / A^w/^mwma， 15:125,1998)，挤压伤模型 (Bunge, R.P.等,Advances in Neurology. FJ Seil (ed), Raven Press:纽约, 75-89, 1993; Bunge, R.P.等，神经再生，重组，和修复.FJ Seil (ed)， Leppincott國Raven Publishers: Philadelphia, 305-315, 1997)，挫伤模型 (Stokes, B.T.等，Wewo"flwma, 9:187, 1992)等等。挫伤模型最适合于模 仿急性非穿孔的跌打损伤。形成的损伤通过组织检查评估(例如，光学或 电子显微技术，染色和示踪；Gruner， J.A., A^wo"m^a， 9:123, 1992); 电生理结果的测量(例如，evoked potential; Metz等 /脸固加訓a, 17:1, 2000)或行为评估(例如，外出行走能力或在斜面上体位的稳定度；Basso 等，J.脸腾f謂廳，13:343, 1996)。在另一方面，本发明涉及治疗轴突被切断的外周神经损伤的药物成 分，尤其是切断的神经突长度大于几毫米(例如，大于10毫米)。外周 神经系统中神经元的再生特性具有有限的恢复神经通路功能的能力。新 的轴突任意延伸，并且经常在错误的方向与不适当的目标连接，由此导 致功能异常。例如，若运动源神经已损伤，再生长的轴突被带入错误的 肌肉，这样导致麻痹。另外，在已切断的神经突长度大于几毫米(例如， 大于10毫米)的地方不会出现合适的神经再生，是因为神经突未能在它 们需要的时候生长或者轴突生长在错误方向。通过外科方法修复外周神经损伤的努力导致不同的效果。在某些情况 中，用于获得已切断的神经末梢的同心度的缝合步骤刺激瘢痕组织的形 成，其被认为是抑制了轴突的再生。即使在瘢痕组织形成减少的部位， 成功的神经再生仍然限于小于10mm的神经损伤。另外，当损伤或神经病变影响神经细胞本身的细胞体或者导致远端轴突的广泛退化的情况 下，外周神经元的修复能力显著受到抑制。本发明的成分使神经细胞再 生，并且提供神经损伤位点的完整的结构连续性，由此可治疗哺乳动物 已切断的神经突长度大于IO毫米的外周神经损伤。另一方面，本发明涉及用于治疗疾病导致的外周神经病变和与疾病相 关的状态的药物成分。疾病导致的外周神经紊乱可以是糖尿病性神经病 变。糖尿病性神经病变在临床上不是由外周神经紊乱引起的，而是归因 于糖尿病症状发生的典型疾病。这些神经病变包括外周神经系统的植物 神经系统和体神经系统中发生的症状。糖尿病性神经病是损害正处于皮 肤下的神经，至少导致以下中的一个症状手指、手、脚趾和脚的麻痹 和麻刺感；四肢无力；四肢的疼痛和烧伤。疾病导致的外周神经病变可 以是与肢端肥大症、甲状腺功能减退症、爱滋病、麻风病、莱姆病、系 统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、斯耶格伦氏综合征、结节性动脉周围 炎、韦格纳氏肉芽肿病、颅动脉炎和肉样瘤病相关的神经病变。本发明的成分使神经细胞再生，并且提供神经损伤的完全的结构连续 性，由此可以治疗与上述疾病相关的外周神经病变和有关情况。在本发明中用作为活性成分的血浆是指哺乳动物血液中典型的体液 物质，换言之，从分离的细胞和细胞碎片中取得的藁黄色的液体物质， 并且该物质和其成分通过本领域的文献众所周知(Westerman, P.,血浆蛋 白，VII-1 to VII-13, 2002; Wendy, Y.C.等，血浆蛋白指南，血液研究基金 会(Foundation for Blood Research)-这些文献的全部内容将在此引用入 本申请作为参考)。在本发明中的成分用作为活性成分的血清通常是指从血浆中除去的 纤维蛋白原、凝血因子等的部分。在本发明中的成分用作为活性成分的血浆或者血清包括从各种哺乳动物中分离出来的血浆或血清，包括人类，非人类灵长类，例如，家畜如绵羊、山羊、猪、马、狗和牛，灵长类，啮齿类等等。在本发明中的血浆或者血清是用常规方法，如离心分离、沉积法或者 过滤法可以容易地从血液中分离得到。'离心分离法是在合适的条件下在血浆中沉淀血液细胞实现的。例如，在大约1,400 rpm离心血液10分钟 可足以沉淀包括血小板和红血球及白血球的所有细胞碎片。包含血浆的 上清液可容易地从制备的细胞中分离出来。这种过滤法可通过适合于从血浆中分离血细胞的过滤器中滤过血液 实现。这种过滤器优选是能够使蛋白质容易地滤过的微孔膜。除了从抽取的血液中通过离心法或沉积法获得的新鲜的液体血浆制 剂和液体制剂外，在血浆或血清使用前以不同形式的保存方法是已知的， 例如，新鲜冷冻制品、冷沉淀物制品、低压冻干制品或者浓縮制品。在 本发明中上述的血浆或血清的所有形式都可使用。新鲜冷冻血浆通过离心血液制备，在抽取血液后6小时之内，在大约 1,400 rpm离心15分钟分离血细胞和血浆，并在大约-4(TC至U-18。C冷冻。 优选使新鲜冷冻血浆在大约30°C 37。C的温水中融解之后使用。冷沉淀血浆通过分离白色沉淀(冷沉淀蛋白)(包含多种因子例如vni:c、纤维蛋白原、xin和纤维结合蛋白)获取，其是在当一个单位的新鲜冷冻血浆在大约4。C融解后，并且在大约-4(TC到-18°0时重新冷冻时产生。为了其使用，冷沉淀物制品是通过将其放置在冰箱(rc 6r)中过夜融解或者在水浴中融解(为快速使用则在大约4"C)。可使用的浓縮血浆是从血液中分离的血浆，将分离的血桨与浓縮剂混合后进行浓縮，浓縮剂例如右旋糖树脂、SEPHDEX、 dextramine，聚丙烯 酰胺、生物胶P、硅凝胶、沸石、葡聚糖胶(DEBRISAN)，交连琼脂糖、 淀粉和藻酸盐，然后从浓縮的血浆里分离浓縮剂。在本发明的一个实施例中，可使用从血库(BloodBank)中购买的血 浆或血清。例如从血库中购买的粉状制品、Invitrogen公司(InvitrogenCorporation)的液体制剂(例如，Gibco 小鸡血清、Gibco 山羊血清、 Gibco 小羊血清、Gibco 猪血清、Gibco 兔血清)或者 GeminiBio隱Products(USA)的血清制品(例如，可使用小鸡血清 (Cat.#100-161)，狗血清(CatJ 100-160),供体驴血清(Cat.弁100-151)，供体 山羊血清(Cat.#100-109)， 供体鼠血清(Cat.#100-155), 猫血清 (Cat.100-153),豚鼠血清(CatJ100-130)，猴血清(Cat.#100-154),小鼠血 清(CatJ100-113),猪血清(CatJ100-115)，兔血清(CatJ100-l 16),大鼠血 清(CaUH00-150)或者绵羊血清(CatJ100-117)。来自包括人在内的哺乳 动物的血浆单位中制备的这些制剂从检测结果确定与乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)和丙型肝炎(HCV)的抗体没有反应，与HIV-1禾卩HIV-2的抗体 反应呈阴性。用于制备这些制品的血浆的所有组经过标准检验均没有病 原体。使用除所述的制品外的血浆或血清，优选为灭活有包膜病毒，例如 血浆或血清中的HIV、乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒(HCV)以降低传 染性病原体传播的潜在风险。灭活血浆的方法中的通用方法包括巴斯德 氏灭菌法、干热处理、蒸汽处理、有机溶剂/去垢剂混合物处理(例如，三 (n-丁基)/磷酸盐/聚山梨醇酯80)，低pH(pH4),低温乙醇分级分离法、色 谱法、纳米过滤法。最近紫外线辐射,Y-射线辐射、碘处理正在发展。使 用经过Y-射线辐射、亚甲蓝处理和蒸汽处理持续循环灭活存在于血浆中 的病毒的血浆是适宜的。当在本发明中使用的血浆或血清通过加热、低压冻干法或其它适宜 干燥技术进行粉末化后，血浆或血清可以使用。例如血浆或血清在-4(TC 以下冷冻干燥数天(如大约7天)成粉后可以使用。为有效地治疗神经损伤，本发明的药物成分中使用的血浆或血清应当 容易作用于靶位点。为此目的，根据本发明所合适使用的成分是以血浆 或血清作为活性成分与一种或多种制药上可接受的辅料或载体结合的制品形式制备。在此所使用的"制药上可接受的"术语是指可与活性成分混 合的载体或辅料并对目标物无害。在本发明中，血浆或血清是以药物成分总重的0.1-99.9wt。/。存在。可选的血浆或血清可不与辅料、载体或稀释剂结合而单独使用。根据本发明的血桨或血清可局部给药。适于局部给药的组分包括半固 体相、半流体相或液相组分，例如糊剂、凝胶、溶液、乳浊液或悬浮液。 发明的成分优选的给药途径可以是肌内的、皮下的或经皮肤的注射或输 注。其组分可选得以冻干粉的形式，其与经生理性体液等渗并用适当的pH缓冲的介质重建后使用。这些组分可使用制药领域公知的设备或方法 混合不同的成分，并溶解或揉搓混合物制备[Remington's Pharmaceutical Science, 18th Edition, 1990, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042 (Chapter 87: Blaug， Seymour)]。优选的活性成分可按 配方制备成糊剂。发明的成分可包含至少一种选自于以下附加的复合物组成的组中粘 性调整剂，例如蜂蜡、三山嵛酸甘油酯(glyceryl tribenhenate)和丙三基 三肉豆蔻酸甘油盐(glyceryl trimyristate);缓冲液，例如偏磷酸钾 (potassium metaphosphate)、磷酸氢二钾(potassium phosphate)、 单 石咸酉昔酸钠(monobasic sodium acetate)、禾口无7jc拧丰蒙酸钠(anhydrous sodium citrate);表面活性能剂如碱金属脂肪酸、二甲基二烃卤化铵(dimethyl dialkyl ammonium halide)、烷基卩比卩定卣化物(alkyl pyridinium halide)、 烷基磺酸盐(alkyl sulfonate)、脂肪氧化胺(fatty amine oxide)和2-烷 基季按味唾琳(2國alkyl imidazoline quaternary ammonium);增桐齐U，如 石蜡、氧化硅、十八醇十六醇混合物(cetostearyl alcohol)和蜂蜡；稀释 剂，例如甘露醇、山梨醇、淀粉、白陶土和蔗糖；防腐剂，例如对羟基 苯甲酸酯(paraben);碱化剂(alkalifying agents)，例如碳酸铵、二乙 醇胺、乙醇胺、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、和氢氧化钠；酸化剂，例如盐酸、硝酸、醋酸、氨基酸和柠檬酸；抗氧化剂，例如抗坏血酸、抗坏血酸钠、丁羟基茴香醚、二叔丁对甲酚、硫代甘油、和甲醛次硫酸钠；乳化或悬浮剂，例如PVP、凝胶、天然糖、阿拉伯胶、瓜尔胶、琼 脂、皂土、羧甲基纤维素钠、和聚乙二醇；稳定剂；和染色剂，例如氧 化铁、二氧化钛、和铝色淀(aluminum lake)。根据本发明血浆或血清的剂量应当考虑患者的健康状况和神经损伤 的程度来适当得确定。对于成年人，用于损伤的剂量为每次大约 0.0001 5 mg/cm2。实施例在下文中，本发明将结合实施例进一步详细描述。然而应当理解这些 实施例用于说明解释的目的，而并不是用作对于本发明范围的限制。实施例1:含血浆的糊剂的制备经过HIV、HCV和HBV检验的人源血液成分(韩国中央血液中心，新 鲜冷冻血浆)在3(TC融解，然后按10 g/5 cc的比例与生理盐水溶液混合， 从而制备含血浆的糊剂。实施例2:具有脊椎损伤的大鼠模型的制备在检测中使用雌鼠(SD大鼠(Sprague-Dawley)，大约两个月大;体重 200-220g;从医药动物实验部获得，延世大学，韩国)。这些大鼠保持在 12小时光照/12小时黑暗的循环，并允许自由获取食物和水，这些是根 据实验动物管理评价认定协会制定的机构动物照养及使用委员会指南来 词养。为了 BBB检测和方格步行检测(grid walk test)，在外科手术前 14天开始对动物进行基本步行训练。在外科手术前3天，对动物进行行 为和活动功能的基本评估，这样选择了 25个大鼠用于检测。选中的鼠将25 mg/ml的氯胺酮和1.3 mg/ml的甲苯噻嗪的混合物按2 kg/ml进行完全麻醉，根据Schucht, P.等人的方法CBc; en'mewto/, 2002)接受L2腹侧椎板切除术(L2 Ventral Laminectom)。为了预防感染，在外科手术中和之后，按5 mg/100 g体重/天给动物肌肉注射抗生素头孢氧苄。打开每个大鼠的第二腰椎，使用微 型咬骨钳在大鼠的左侧弓形椎骨的外侧穿刺一个小孔(l mm2)。将手术刀 柄的刀片插入孔中，经由硬脑膜到右侧弓形椎骨外侧切割，这样形成脊 柱腹部的外伤性损伤。在外科手术以后，大鼠放在暖锯屑上保护其体温， 每天按摩其腹部以下的部分3-4次，连续7天，以排出膀胱的内含物， 直至其自主性膀胱控制完全恢复。在神经损伤的外科手术以后3天，进行BBB检测(Basso， D.M.， Beattie, M.S.和Bresnahan， J.C.,从A^^o"atmm, 12:1, 1995)用于评估大鼠的开放 步行能力。大鼠放入具有一个粗糙的表面的透明的玻璃盒子，观察4-5 分钟。动物根据多个标准包括关节活动、承重、前后足协调性、和尾部 的位置进行分级，以0-21进行评分，其中0是后足没有移动的能力，而 21是动物具有正常行走能力。在脊神经损伤的外科手术以后3天，进行方格步行检测(Z'Graggen等， J 7Vewra5c/., 18; 4744, 1998)以评估大鼠的运动能力。在方格步行检测中， 允许大鼠在1米长平行的金属杆上行走，以评估保持规则步伐循环的能 力。还允许大鼠在下倾杆上向下行走，以评估后腿的控制能力。通过数 失误的步数实施评估。IO个误步表明大鼠不能规则步行，不能控制四肢。 0-1个误步表明大鼠没有损伤，具有正常的行为能力。在25个动物中，BBB检测和方格步行检测显示20个动物具有相似 的分数，其平均分数在BBB检测中大约为11分，在方格步行检测中大 约为6分。根据双盲法通过两个观察者确定分数。剩余5个动物显示显 著地不同的行为，明显地偏离平均分，因此从实验动物中排除。实施例3:椎骨损伤的鼠模型进行含血浆成分的处理在实施例2中挑选20个动物，10个动物(处理组)按以下方式进行处理。IO个动物的第二腰椎骨的脊神经损伤部分用在实施例1中制备的 含血浆的糊剂。然后缝合背部肌肉系统，皮肤用外科手术夹缝合。同时， 剩余的IO个动物(对照组)用生理盐水溶液代替糊剂进行处理，然后用 上述同样的方式进行缝合。实施例4: BBB检测和方格步行检测在实施例3中，IO个动物(处理组)用100 iU(2mg/ul)含血浆的糊 剂在其脊神经损伤部位进行处理。在实施例3中，IO个动物(对照组) 用生理盐水溶液处理其神经损伤部位，根据实施例2中描述的方法BBB 检测和方格步行检测在脊神经损伤的外科手术之后3天开始间隔一周实 施。图1显示BBB检测的结果，图2显示方格步行检测的结果。如从检 测结果中看到的，处理组和对照组在外科手术后35天达到恢复的峰值。 另外，如同双样本曼-惠特尼U (Mann-Whitney U)统计分析中看到的，处 理组在BBB检测(p〈0.05)和方格步行检测(pO.05)中恢复与对照组存在显 著差异。实施例5:足迹分析在脊神经损伤的外科手术之后35天，处理组、对照组和正常鼠的足 底染上墨水，然后在白纸上步行。根据多个标准，包括步长(两个连续 步伐的足底之间的距离)，支撑基底(左足底和右足底之间的距离)， 旋转角(由足底和脚趾的角度设定的线之间的交角)(Kunkel-Bagden, E. 等，五xpA^Mro/., 119, 153, 1993)进行每个动物的足迹分析。图3显示正常 组、对照组、处理组的足迹分析照片。如在图3中可见的，显示处理组 脚印与正常组相似。实施例6:电生理分析脊神经损伤的外科手术后35天，对照组和处理组鼠用按1.5g/每kg 体重的剂量的氨基甲酸乙酯麻醉，暴露其感觉运动皮质和其后腿的坐骨 神经。在前颅左侧大约1-2 mm和前颅的前方(rostrocaudal)大约1 mm处将0.5 mm同心针电极以右侧感觉运动皮质1 mm深度插入，再使用3 mA 的电脉冲找到传递最佳信号到后腿的坐骨神经的位置。离线在最佳剌激 位置分析反应强度和感觉神经等待时间。图4通过两个独立样本t-检测 显示感觉神经潜伏期的结果。如图4中显示的结果可见，处理组的坐骨 神经平均潜伏期显著低于对照组(p〈0.05)的平均潜伏期。这说明含血浆的 糊剂使神经细胞再生，轴突通过再生的神经细胞连接，从而实现正常的 功能。实施例7:组织学分析脊神经损伤的外科手术后的35天，，对照组鼠和处理组鼠经注射过量 的麻醉剂实施安乐死。脊神经损伤部位的第二腰椎，和与其相连的胸椎、 第三腰椎和第四腰椎被移去，剩余组织浸入10%的福尔马林缓冲液48小 时，并在石蜡中包埋。组织在纵向上切成2-5pm厚度的矢状面，制备组 织段，连续地放在载玻片上。载玻片用苏木精和伊红染色。图5A至5C 是对照组组织的放大照片(5倍，10倍和20倍放大率)，图5D至5F 是处理组组织的放大照片(5倍，10倍和20倍放大率)。如图5D至5F 所示，处理组的损伤位点显示广泛地完整的结构连续性，从而表明发明 的药物使神经细胞再生并且具有对脊神经损伤的实质疗效。另一方面， 如图5A至5C所示，对照组的损伤位点已腐烂。工业实用性如上所述的，本发明提供神经损伤的治疗的药物成分，其包含治疗上 有效剂量的血浆或血清。药物成分包括根据本发明的血浆或血清具有使 损伤神经细胞再生和愈合的疗效，从而神经细胞具有正常功能。即使本发明的具体实施例已经详细描述，本领域技术人员可理解该说 明书仅记载了优选实施例，并不用于解释本发明的范围的限制。
权利要求
1.一种治疗神经损伤的药物成分，其包含药物有效剂量的作为活性成分的血浆或血清。
2. 根据权利要求l所述的药物成分，其特征在于，以选自在局部给 药的糊剂、溶液、悬浮液和凝胶组成的组中任一一种形式存在。
3. 根据权利要求l所述的药物成分，其特征在于，所述血浆或血清 的含量是基于成分重量的0.1-99.9wtM 。
4. 根据权利要求l所述的药物成分，其特征在于，神经损伤是外周 神经损伤或脊神经损伤。
5. 根据权利要求1所述的药物成分，其特征在于，神经损伤是指神 经被切断的损伤。
6. 根据权利要求5所述的药物成分，其特征在于，神经损伤是指在 该损伤中神经被切断且被切断的神经突长度大于10mm。
7. 根据权利要求l所述的药物成分，其特征在于，外周神经损伤是 与糖尿病性神经病变、肢端肥大症、甲状腺功能减退症、爱滋病、麻风 病、莱姆病、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、斯耶格伦氏综合征、 结节性动脉周围炎、韦格纳氏肉芽肿病、颅动脉炎、肉样瘤病中的一种 疾病相关的神经机能紊乱。
全文摘要
本发明涉及一种治疗神经损伤的药物成分，尤其是其包含血浆或血清作为活性成分的治疗神经损伤的药物成分。发明的成分在脊神经损伤后使神经细胞再生，在脊神经损伤位点提供完整的结构连续性。从而，该成分对于治疗神经损伤是有效的。
文档编号A61K35/16GK101232893SQ200680028038
公开日2008年7月30日 申请日期2006年8月8日 优先权日2005年8月11日
发明者津 李, 李相烨, 柳元敏, 柳来春, 琴基昌 申请人:株式会社美迪基尼斯
文档序号 :
【 1125240 】
技术研发人员：柳元敏,柳来春,琴基昌,李相烨,李津
技术所有人：株式会社美迪基尼斯
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
声 明 ：此信息收集于网络，如果你是此专利的发明人不想本网站收录此信息请联系我们，我们会在第一时间删除
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