生物技术2-羟基异丁酸生产的制作方法
【专利摘要】本发明涉及表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细菌，用于生产2-羟基异丁酸的方法，包括在水性介质中使氢氧细菌或产乙酸细菌与包含氢气和二氧化碳的混合气体混合物接触，以及氢氧细菌或产乙酸细菌在2-羟基异丁酸生产中的应用。
【专利说明】生物技术2-羟基异丁酸生产
[0001] 本发明涉及表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌（knallgas bacterium)或产乙酸细菌，用于生产2-羟基异丁酸的方法，包括在水性介质中使氢氧细菌 或产乙酸细菌与包含氢气和二氧化碳的混合气体混合物接触，以及氢氧细菌或产乙酸细菌 在2-羟基异丁酸生产中的用途。
[0002] 日渐增长的全球人口和全世界提高的生活标准不可避免地加强了人们一方面对 于商品和服务的需求和另一方面对可持续发展以及对自然和地球资源的慎重处置的需要 之间的冲突。未来不仅仅是化石碳源会变得有限，而且目前被处置和勘探的地点的可及性 也会越来越受到阻碍。已知的事故极大地证明了这种危险，例如最近在墨西哥湾的石油灾 难。白色生物科技提供了一种优雅的方式来提供替代物，这不仅仅是因为微生物或细胞组 分的应用，还因为广谱的新一代可再生基质的应用。
[0003] 很久以来，化学工业已在生物技术工艺中批量规模生产，例如醇类和有机酸，主要 是用作化学品，尤其是作为能源载体。其中生物乙醇是构成现代机动车辆燃料的近期要素， 并且生物丁醇也在考虑范围内。基于批量规模能源载体生产的知识，最近意图设想将平台 化学品延伸至更广泛的应用。特别尝试合成化学品如1，3-丙二醇，琥珀酸盐，葡萄糖酸或 柠檬酸。同样地，2-羟基异丁酸（2-HIB)也很适合该方案，因为它正发展成为平台化学品。 特别是，由于2-HIB可被用作甲基丙烯酸(一种重要产品如Plexiglas?的合成所需要的单 体化合物）的前体，并且可被用作涂层材料，涂料和粘合剂的重要组分。
[0004] 通常，传统的生物技术工艺，例如用于生物乙醇生产的工艺，是基于所谓的第一代 的碳源，即直接来源于植物的碳水化合物如糖或淀粉。但事实证明，这种资源是有限的，它 们似乎更适合于生产食品而不是化工产品。
[0005] 现有技术教导了 2-HIB生产的生物技术路线。例如，PCT/EP2009/055089教导了 已被基因修饰，以致于与其野生型相比能够生产更多2-羟基异丁酸或更多含有2-羟基异 丁酸单体单元的聚羟基脂肪酸酯的细胞，其特征在于2-羟基异丁酸或含有2-羟基异丁 酸单体单元的聚羟基脂肪酸酯的生产以乙酰乙酰基-辅酶A作为中间产物并以3-羟基 丁酰-辅酶A作为前体。但是，2-HIB的生产工艺考虑使用含碳水化合物的碳水化合物 (carbohydrate-containing carbohydrates)或其衍生物，例如葡萄糖酸钠，从环境的角度 来说这应当被避免。而且，在所述碳水化合物的生产中所消耗的二氧化碳的很大比例并不 被转化为所需的产物2-HIB，而是在通向2-HIB的过程中的各种代谢途径中丧失了。
[0006] 因此，本发明所基于的问题是发明一种生产2-HIB的工艺，其能在缺少高能有机 化合物的条件下进行。而且，本发明所基于的问题是发明一种2-HIB生产的生物技术路线。 而且，本发明所基于的问题是发明一种用于2-HIB生产的生物技术方法，其与现有技术工 艺相比的优越之处在于所获得的2-HIB中有更多的碳原子来源于二氧化碳分子，S卩，来自 于二氧化碳，而不是来自于其它任何有机分子(例如醇类或碳水化合物）的碳原子的比例更 商。
[0007] 本发明所基于的问题由所附权利要求的主题解决。
[0008] 在第一方面，本发明所基于的问题由表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细 菌或产乙酸细菌解决。
[0009] 在第一方面的第一实施方案中，细菌被基因修饰以使得它与各自的野生型菌株相 t匕，具有降低的合成聚羟基丁酸酯的能力。
[0010] 在第一方面的第二实施方案中，其也是第一实施方案的一个实施方案，细菌具有 聚羟基丁酸酯合成酶基因敲除。
[0011] 在第一方面的第三实施方案中，其也是第一至第二实施方案的一个实施方案，细 菌不能合成聚羟基丁酸酯。
[0012] 在第一方面的第四实施方案中，其也是第一至第三实施方案的一个实施方 案，细菌是选自包含甲烧细菌（ifeiAafloAacteritt?)、醋酸杆菌、 脱硫弧菌（ZfesWfbFiArio)、脱硫单胞菌、副球菌（Zkracoccw1S)、 无色杆菌 ier)、产喊杆菌 、假单胞菌 O01SeworOfflma1S)、 诺卡氏菌OVocart/ia)和贪铜菌（Copriariofe)的组的氢氧细菌，且优选是贪铜菌 (Copriariofe)菌株，最优选是钩虫贪铜菌（Copriariofe flecaior) H16,或者是选自 包含梭菌irit/ia?)、穆尔氏菌（IfooreBa)和厌氧醋菌OceioaflaeroAitt?)、醋 酸杆菌 、古球菌 、丁 酸杆菌（及/ijriAacteria?)、 Carboxydibrachium、CarboxydocelIa、一 氧化碳嗜热菌（CkrAiorjOrO iAe/SMAs)、朽1 樣酸杆 菌（CYirc^acier)、脱硫肠状菌（ZfesW/bioffiacWtt?)、真细菌甲烧八叠球 菌（IfeiAaflo 1Sarcifla)、甲烧嗜热杆菌（IfeiAafloiAerffioAacier)、产醋杆菌（AroAacier)、 消化链球菌 Oc^iosire/?iOCOCC^AS)、红假单胞菌 0?Ο￡/〇/75·<9?￡/6_/7<35·)、红螺菌 {JihodospirilIum)、反反兔魯（Mubrivivax)、Thermincola、散豫魯 iThermococcus)、散石 妖麗（Jhermolithobacter)、蹲紙厌氧妖麗{Thermoanaerobacter、私 Thermosyntrophicum 的组的产乙酸细菌。
[0013] 在第一方面的第5实施方案中，其也是第一至第四实施方案的一个实施方案，细 菌表达包含SEQ ID NO 1的核酸或其变体或由所述核酸编码的多肽或所述多肽的变体，并 且表达包含SEQ ID NO 2的核酸或其变体或由后一种核酸编码的多肽或后一种多肽的变 体。
[0014] 在第一方面的第6实施方案中，其也是第一至第5实施方案的一个实施方案，细菌 除了表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶外，还表达MeaB蛋白，由SEQ ID NO 3编码的多肽 或其变体。
[0015] 在第一方面的第7实施方案中，其也是第一至第6实施方案的一个实施方案，细菌 表达，细菌能够合成3-羟基丁酰-辅酶A。
[0016] 在第一方面的第8实施方案中，其也是第一至第7实施方案的一个实施方案，细菌 表达，细菌表达β -酮硫酶和乙酰乙酰基-CoA还原酶。
[0017] 在第二方面，本发明所基于的问题由2-羟基异丁酸的生产方法解决，该方法包括 a)在水性介质中使根据权利要求1-9任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌与包含氢气和 二氧化碳的气体混合物接触。
[0018] 在第二方面的第一实施方案中，气体混合物中氢气的分压为0. 1-100巴，更优选 0. 2-10巴，最优选0. 5-4巴，而二氧化碳分压为0. 03-100巴，更优选0, 05-1巴，最优选 0. 05-0. 3 巴。
[0019] 在第二方面的第二实施方案中，其也是第一实施方案的一个实施方案，细菌耐受 氧的存在，且水溶液是有氧的。
[0020] 在第二方面的第三实施方案中，其也是第一至第二实施方案的一个实施方案，细 菌耐受氧的存在，且气体混合物除了氢气和二氧化碳之外，还包含氧气，并且气体混合物中 氧气的分压优选是〇. 03-10巴，更优选0. 04-1巴，最优选0. 04-0. 5巴。
[0021] 在第二方面的第四实施方案中，其也是第一至第三实施方案的一个实施方案，水 性介质不包含碳水化合物，或优选不包含除二氧化碳之外的任何碳源。
[0022] 在第二方面的第5实施方案中，其也是第一至第四实施方案的一个实施方案，步 骤a)在缺乏除碳以外的其它生长限制营养素的条件下进行。
[0023] 在第二方面的第6实施方案中，其也是第一至第5实施方案的一个实施方案，步骤 a)在20-37 °C，更优选25-35 °C，最优选在28-32 °C进行。
[0024] 在第三方面，本发明所基于的问题由根据本发明的任意方面或实施方案的氢氧细 菌或产乙酸细菌在生产2-羟基异丁酸中的用途解决。
[0025] 本发明是基于这样的令人惊讶的发现：表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧 细菌或产乙酸细菌可被用于生产2-HIB。
[0026] 而且，本发明是基于这样的令人惊讶的发现：可以通过这种方式增加这种工艺的 产量：对于2-HIB的生产，使用表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细 菌，其与各自的野生型菌株相比，具有降低的合成聚羟基丁酸酯的能力。
[0027] 而且，本发明基于这样的令人惊讶的发现：可以通过这种方式增加这种工艺的产 量：对于2-HIB的生产，使用表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细菌， 并经受除了缺乏碳源之外的生长限制条件。
[0028] 本发明集中于表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细菌的用 途。这些细菌通常具有代谢包含氢气和二氧化碳的混合物以生成有机化合物的能力。
[0029] 本发明考虑野生型和基因修饰的产乙酸细菌或氢氧细菌的用途。在优选的实施 方案中，本文使用的术语"产乙酸细菌"指能够利用Wood-Ljungdahl途径，即将一氧化碳， 二氧化碳和氢气转化为乙酸盐的途径的细菌。在优选的实施方案中，Wood-Ljungdahl途 径中涉及的至少一种酶的活性相对于野生型细胞来说被增强。在优选的实施方案中，如本 文使用的，术语"Wood-Ljungdahl途径中涉及的酶"包含与所述途径的一种底物，优选一 氧化碳，二氧化碳或氢气结合，或与随着底物被转化为乙酸盐或其衍生物的过程，在由这 些底物中的任一种开始的途径中形成的任何中间产物结合的，或者接受其为底物的任何 酶。在另一个优选的实施方案中，如本文所使用的，术语"Wood-Ljungdahl途径中涉及的 酶"指来自包含CO脱氢酶和乙酰-CoA合成酶的组的酶。在优选的实施方案中，产乙酸细 菌选自包含梭菌（C/osirii/itt?)、穆尔氏菌（IfooreBa)和厌氧醋菌、 醋酸杆菌 、古球菌 、丁 酸杆菌（及/ijriAacteria?)、 Carboxydibrachium、CarboxydocelIa、一 氧化碳嗜热菌（CkrAiorjOrO iAe/SMAs)、朽1 樣 酸杆菌、脱硫肠状菌、真细菌、 甲烧八叠球菌CifeiAaflo1Sarcifla)、甲烧嗜热杆菌（IfeiAafloiAerffioAacier)、产醋杆菌 (AroAacier)、消化链球菌、红假单胞菌 0?Ο￡/〇/75·<9?￡/6_9/7<35·)、 红螺菌 红长命菌 Oft/AriKiFar)、?6?r?i/7co/a、热球菌 {Thermococcus')、散石:舊（Jhermolithobacter)、蹲散厌梟紙舊（Jhermoanaerobacter) 和?<9r避的组。示例性的产乙酸细菌包括，但不限于潮湿厌氧醋菌 /?<9tera)、伍氏醋酸杆菌 r<9(9i/ii)、闪烁古球菌 iArchaeoglobus fulgidus)、食 ψ^~Χ豫妖儀 iButyribacterium methylotrophicuni)、食 ψ 基了驗妖儀、Butyribacterium methyl trophicuni)，Carboxydibrachium pad ficus ^ Carboxydocella sporoproducens^ Carboxydocella thermoautotrophica、H -策也 碳嗜热菌避as* AjWra沢/?<9/b_r舰/76* )、梓樣酸杆菌 179 (CY tro/?况 ter 6/7. 7_/6〇、醋酸梭菌、丙酮丁醇梭菌、 自产乙醇梭菌，{Clostridium autoethanogenuni)、食一氧么敬敬儀{Clostridium ca_r/?(9uWirara/?6〇、杨氏梭菌（C/iOsirii/i? 、食一氧化碳脱硫肠状 M {Desulfotomaculum carboxydivorans) Λ 库氏脱硫肠状菌 C^esi/J/bto應ei/J· kuznetsovif)、紙 m傲漁、歇{Desulfotomacuhim thermobenzoicum subsp·)、 、粘液真杆菌的/如c 7i避λ^--)、食乙酸甲焼八叠球菌62? (Methanosarcina acetivorans CM)、E 氏 ψ 像J叠豫舊（Methanosarcina barkerf)、 热自养甲焼嗜热杆菌CifeiAa/? 况ter iAa/舊扮"? <9 ir 、穆尔氏菌 CM9〇r<977a 、热醋穆尔氏菌（M9〇r<977a 、热自养穆尔氏菌 Cifoordh 、普氏产醋杆菌（flro如cter 、产生消化链球菌 iPeptostreptococcus productus) {Peptostreptococcus productus) ^ 沿每怒麗P4 {Rhodopseudomonas palustris P4)、類忽^￡爆黨{Rhodospirillum rubrum) λ 1? ^ ^ ^ {Rubrivivax gelatinosus) Λ Thermincola carboxydiphiIaΛ 、热球菌 、食一氧化碳热石杆菌 (Jhermolithobacter carboxydivorans)私令久板鴻紙沃氧妖儀 ijhermoanaerobacter kivui). 在另一个优选的实施方案中，产乙酸细菌是通常被基因修饰以产乙酸的细菌，而相应 的野生型菌株不产乙酸。在这种情况下，细菌可以是任何可进行这种修饰的生物体，例如大 肠杆菌。
[0030] 在优选的实施方案中，如本文使用的，术语"氢氧细菌"指任何能够使用氧作为 最终电子受体来氧化氢，并能够在好氧条件下固定二氧化碳的细菌。在优选的实施方 案中，氢氧细菌选自包含甲焼细菌醋酸杆菌 脱硫弧菌（Zfes^//bKi/?ri(9)、脱硫单胞菌（Zfe6*〃7/bffi(9/?a6〇、副球菌（^_raec^〃6〇、无色 杆菌C^Arc?(9如eter)、产喊杆菌、假单胞菌、诺卡氏菌 和贪铜菌（i7w/7riaKii*6〇的组，并且优选是贪铜菌（i7w/7riaKii*6〇菌株，更优 选是钩虫贪铜菌H16。示例性的氢氧细菌包括，但不限于敏捷食 酸菌 raraz Z^i7i6〇、食酸菌 raraz 6/7.)、真养产喊杆菌 沢/?<96* )、慢生型大豆根瘤菌（Ara办 japonicuni)、燒後'瘤舊{Bradyrhizobium sp.)、钩虫贪铜菌5?7 (Cupriavidus /?6^ior ZAW 5?7)、螺杆菌 〇76*7i(9^cter 6/λ )、产氧杆菌(你 --^6*/?(9如cter 6/λ )、嗜热 产董奸舊 Qfydrogenobacter thermophiIus)、真氧董单觀舊 Qfydrogencmonas eutropha)、 泛氧氢单胞菌 氢单胞菌 6/7.)、敏捷 氢单胞菌 )、氢嗤胞菌 O^Fi/re^/76/7.)、海洋氢弧菌 Qiydrogenovibrio marinus) (MH-1W 株）、m舊 Qfydrogenovibrio sp、、氧集i'傲生A% {Oxyhydrogen microorganism) {Pseudomonas hydrogenothermophila) ^ 食氢假单胞菌AjWro沢/?(9rara)、假单胞菌6/7.)、真养 青枯菌 Ofehi、青枯菌6/7.)、大豆根瘤菌 、根瘤菌 6/7.)、混池红球菌 (9/7况"6〇、红球菌 6/7.)、嗤酸红假单胞菌（/^(9^/(9/76^(3^(9/7^5* adW(9/7Ai7a)、生芽红假单胞菌 {Rhodopseudomonas blasticd)、赛·怒{Rhodopseudomonas capsulatd)、沿释 假单胞菌（7^(9^/(9/76^饥/6_9/?狀 7^(9^/(9/76^饥/6_9/?狀 iaroitfes*、绿硫红假单胞 M {Rhodopseudomonas sulfoviridis) λ {Rhodopseudomonas viridis) Λ 红假单胞菌5/7.)、深红红螺菌ττ/Δ/γ/ffi)、红螺菌 {Rhodospirillum sp. {Thiocapsa roseopersicina) {Thiocapsus 6/7.)、争论贪嗤菌（KarioraravT /7arai/(ara6〇、贪嗤菌（KarioraravT 6/7.)、黄色杆菌 {Xanthobacter sp.)、海洋嗜热解氢杆菌沢/?<9iAa/皿as* 、真养青枯菌 (9"tn9/7Aa)、钩虫贪铜菌、真养产喊杆菌 <9"tro/7to6〇、争论产喊杆菌（^7ca7i沢/7(96* /7arat/(〇?s〇、脱氮副球菌 、敏捷假单胞菌（/?^饥Z^i7i6〇、黄假单胞菌（/?^饥/c_9/?a6* /!Zara)、帕氏假单胞菌/7a77aro/?ii)、嗤糖假单胞菌 saccharophila)，取赵爲黨{Rhodococcus sp·)(不透明诺卡氏菌（Nocardia opaca))、类 黄假单胞菌0--〃心?。在另一个优选的实施方案中，氢氧细菌被基因修 饰成为氢氧细菌，而相应的野生型菌株不是氢氧细菌。在这种情况下，细菌可以是任何可进 行这种修饰的生物体，例如大肠杆菌。
[0031] 可用于解决本发明所基于问题的许多细菌能够合成聚羟基丁酸酯，一种被用于储 存细胞摄取的碳的化合物。这种细菌利用一种或多种聚羟基丁酸酯合成酶。在优选的实施 方案中，如本文使用的，术语"聚羟基丁酸酯合成酶"指能够通过催化链长度为3-14个碳原 子的中链酰基-CoA，优选羟基丁酸CoA的聚合来合成聚羟基脂肪酸酯的酶。
[0032] 在优选的实施方案中，所发明的细菌被基因修饰以使得它与各自的野生型菌株相 t匕，具有降低的合成聚羟基丁酸酯的能力，或者合成聚羟基丁酸酯的能力降低以使得细胞 不再能够合成可检测量的聚羟基丁酸酯。在优选的实施方案中，编码聚羟基丁酸酯合成酶 的至少一个基因，优选所有基因被敲除，例如通过向阅读框中引入终止子以达到表达不完 整的无活性的蛋白的效果。
[0033] 在优选的实施方案中，如本文使用的，术语"2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶"指能 够催化形成2-羟基异丁酰-辅酶A的酶，优选通过将3-羟基丁酸辅酶A转化为2-羟基异 丁酰-辅酶A来实现：
【权利要求】
1. 表达2-羟基异丁酰-辅酶A变位酶的氢氧细菌或产乙酸细菌。
2. 根据权利要求1的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌被基因修饰以使得其与各 自的野生型菌株相比，具有降低的合成聚羟基丁酸酯的能力。
3. 根据权利要求2的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌具有聚羟基丁酸酯合成酶 基因敲除。
4. 根据权利要求1-3任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌不能合成聚羟基 丁酸酯。
5. 根据权利要求1-4任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌是选自包含甲 烧细菌（IfetAafloAac)、醋酸杆菌 )、脱硫弧菌FiArio)、 脱硫单胞菌、副球菌、无色杆菌 、产 喊杆菌、假单胞菌、诺卡氏菌（Abcart/ia)和贪铜菌 (Copriarit/ys)的组的氢氧细菌，且优选是贪铜菌菌株，最优选是钩虫贪铜菌 flecator) H16,或者是选自包含梭菌（C/iostrit/itt?)、穆尔氏菌（ifoore^a)和厌氧醋 菌 、醋酸杆菌 、古球菌 、丁 後第：魯 Q^utyribacterium')、Carboxydibrachium、Carboxydocella、一 氧化碳嗜热菌 (CkrAiorj^/o 从<9/?皿5〇、朽1 樣酸杆菌（CYtroAacter)、脱硫肠状菌、 真细菌、甲烧八叠球菌（Ifez^aflosarcifla)、甲烧嗜热杆菌 (M9Z^a/7(9 从6?r?o办aeter)、产醋杆菌（ftro办aeter)、消化链球菌（/fe/^ostre/Voecieetts)、 红假单胞菌 0?、红螺菌、红长命菌 Oft/Ari Fi Far)、 ?<9r?i/7co/a、热球菌（Serffiococc^s)、热石杆菌、嗜热厌氧杆菌 (?6?r?oa/7a6?ro办acter)和?的组的产乙酸细菌。
6. 根据权利要求1-5任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达包含SEQ ID NO 1的核酸或其变体或由所述核酸编码的多肽或所述多肽的变体，并且表达包含SEQ ID NO 2的核酸或其变体或由后一种核酸编码的多肽或后一种多肽的变体。
7. 根据权利要求1-6任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达，除了 2-羟 基异丁酰-辅酶A变位酶外，还有MeaB蛋白，优选由SEQ ID NO 3编码的多肽或其变体。
8. 根据权利要求1-7任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌能够合成3-羟基 丁酰-辅酶A。
9. 根据权利要求1-8任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌，其中所述细菌表达￠-酮硫酶 和乙酰乙酰基-CoA还原酶。
10. 生产2-羟基异丁酸的方法，包括 c)在水性介质中使根据权利要求1-9任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌与包含氢气和 二氧化碳的气体混合物接触。
11. 根据权利要求10的方法，其中所述气体混合物中氢气的分压为〇. 1-100巴，更优 选0. 2-10巴，最优选0. 5-4巴，而二氧化碳分压为0. 03-100巴，更优选0. 05-1巴，最优选 0. 05-0. 3 巴。
12. 根据权利要求10-11任一项的方法，其中所述细菌耐受氧的存在，且水溶液是有氧 的。
13. 根据权利要求10-12任一项的方法，其中所述细菌耐受氧的存在，且气体混合物除 了氢气和二氧化碳之外，还包含氧气，并且气体混合物中氧气的分压优选是0. 03-10巴，更 优选0. 04-1巴，最优选0. 04-0. 5巴。
14. 根据权利要求10-13任一项的方法，其中所述水性介质不包含碳水化合物，或优选 不包含除二氧化碳之外的任何碳源。
15. 根据权利要求10-14任一项的方法，其中步骤a)在缺乏除碳以外的生长限制营养 素的条件下进行。
16. 根据权利要求10-15任一项的方法，其中步骤a)在20-37°C，更优选25-35°C，最优 选在28-32 °C进行。
17. 根据权利要求1-9任一项的氢氧细菌或产乙酸细菌在生产2-羟基异丁酸中的用 途。
【文档编号】C12N9/90GK104364373SQ201380031378
【公开日】2015年2月18日 申请日期:2013年6月14日 优先权日:2012年6月15日
【发明者】T.哈斯, Y.席曼, D.普里拜尔斯基, T.罗维德尔, R.H.米勒, H.哈姆斯 申请人:赢创工业集团股份有限公司
文档序号 :
【 467464 】
技术研发人员：T.哈斯,Y.席曼,D.普里拜尔斯基,T.罗维德尔,R.H.米勒,H.哈姆斯
技术所有人：赢创工业集团股份有限公司
备 注：该技术已申请专利，仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
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技术研发人员：T.哈斯,Y.席曼,D.普里拜尔斯基,T.罗维德尔,R.H.米勒,H.哈姆斯
技术所有人：赢创工业集团股份有限公司
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