抗PILRA抗体、其用途以及相关方法和试剂与流程

1.一种特异性地结合至食蟹猴成对免疫球蛋白样2型受体α(cynopilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对所述cynopilra的结合亲和力为对人类成对免疫球蛋白样2型受体β(hpilrb)的结合亲和力的至少2倍。

2.如权利要求1所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段也结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)。

3.一种结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)和食蟹猴pilra(cynopilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对所述cynopilra的结合亲和力相对于对所述hpilra的结合亲和力是在100倍内。

4.如权利要求2或3所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对所述hpilra的结合亲和力为对所述hpilrb的结合亲和力的至少10倍。

5.如权利要求1至4中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中对所述cynopilra的结合亲和力为对所述hpilrb的结合亲和力的至少10倍。

6.一种结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：63、64、78、106、143、116-118和182-186，其中所述位置是参照seq id no:1的序列确定。

7.如权利要求6所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：78、106和143。

8.如权利要求6或7所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:1的g78、k106和e143。

9.如权利要求6或7所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:136的r78、k106和e143。

10.如权利要求6所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：63和64。

11.如权利要求6或10所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:1的t63和a64。

12.如权利要求6所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至位于以下位置中的一者或多者处的一个或多个氨基酸：106、116-118和182-186。

13.如权利要求6或12所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:1的k106。

14.如权利要求6或12所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:1的q116、k117和/或q118。

15.如权利要求6或12所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合至seq id no:1的q182、g183、k184、r185和/或r186。

16.如权利要求1至15中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

17.如权利要求16所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述氨基酸取代为保守取代。

18.如权利要求16或17所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

19.如权利要求1至16中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

20.如权利要求19所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

21.如权利要求1至16中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：

22.如权利要求1至21中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其包含与seq idno:54-63中的任一者具有至少85％序列同一性的重链可变区(vh)序列。

23.如权利要求22所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述vh序列包含seq id no:54-63中的任一者的序列。

24.如权利要求1至21中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其包含与seq idno:137-144和158中的任一者具有至少85％序列同一性的重链可变区(vh)序列。

25.如权利要求24所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述vh序列包含seq id no:137-144和158中的任一者的序列。

26.如权利要求1至25中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其包含与seq idno:64-73中的任一者具有至少85％序列同一性的轻链可变区(vl)序列。

27.如权利要求26所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述vl序列包含seq id no:64-73中的任一者的序列。

28.如权利要求1至25中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其包含与seq idno:145-149中的任一者具有至少85％序列同一性的重链可变区(vl)序列。

29.如权利要求28所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述vl序列包含seq id no:145-149中的任一者的序列。

30.如权利要求1至29中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

31.如权利要求1至30中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

32.如权利要求1至29中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或抗原结合片段包含：

33.如权利要求1至32中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体包含形成fc结构域的两个fc多肽。

34.如权利要求33所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中一个或全部两个fc多肽包含与seq id no:94的序列具有至少85％同一性的序列。

35.如权利要求1至34中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体为igg1。

36.如权利要求1至35中任一项所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体为全长抗体。

37.一种结合至人类成对免疫球蛋白样2型受体α(hpilra)的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段所识别的表位与选自由表1中的抗体克隆1至39组成的组的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同。

38.如权利要求37所述的经分离抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段所识别的表位与选自由抗体克隆2、4和5组成的组的抗体克隆所识别的表位相同或基本上相同。

39.如权利要求1至38中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段拮抗hpilra活性。

40.如权利要求1至39中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段阻断唾液酸化蛋白质与hpilra的结合。

41.如权利要求40所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述唾液酸化蛋白质为唾液酸化npdc1、panp、hsv-1gb、colec12、c4a、c4b、dag1或clec4g。

42.如权利要求1至41中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强egfr或stat3的磷酸化，或减少stat1的磷酸化。

43.如权利要求1至42中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强细胞迁移。

44.如权利要求43所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强小胶质细胞迁移。

45.如权利要求1至44中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强抗炎性基因或蛋白质表达。

46.如权利要求45所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增强il1rn基因表达。

47.如权利要求1至46中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段降低促炎性细胞因子蛋白质表达或分泌。

48.如权利要求47所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段降低tnf、il-6和/或ip-10表达。

49.如权利要求1至48中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增加细胞呼吸。

50.如权利要求49所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增加线粒体呼吸。

51.如权利要求1至50中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增加atp产生。

52.如权利要求1至51中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段增加脂肪酸代谢。

53.如权利要求1至52中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不激活外周免疫细胞。

54.如权利要求53所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段不激活中性粒细胞和单核细胞。

55.如权利要求1至54中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单克隆抗体。

56.如权利要求1至55中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为嵌合抗体。

57.如权利要求1至56中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为人源化抗体。

58.如权利要求1至57中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为全人类抗体。

59.如权利要求1至58中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段为fab、f(ab')2、scfv或二价scfv。

60.一种与权利要求1至59中任一项所述的经分离抗体竞争结合至hpilra的抗体或其抗原结合片段。

61.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至59中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载剂。

62.一种多核苷酸，所述多核苷酸包含编码权利要求1至59中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段的核酸序列。

63.一种载体，所述载体包含权利要求62所述的多核苷酸。

64.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求62所述的多核苷酸。

65.一种用于产生经分离抗体或其抗原结合片段的方法，所述方法包括在表达权利要求62所述的多核苷酸所编码的所述经分离抗体或其抗原结合片段的条件下培养宿主细胞。

66.一种药盒，所述药盒包含：

67.一种治疗受试者的神经退行性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用权利要求1至59中任一项所述的经分离抗体或其抗原结合片段或权利要求61所述的药物组合物。

68.如权利要求67所述的方法，其中所述神经退行性疾病选自由以下组成的组：阿尔茨海默病、原发性年龄相关tau蛋白病、进行性核上性麻痹(psp)、额颞叶痴呆、17号染色体相关的额颞叶痴呆伴帕金森症、嗜银颗粒性痴呆、肌萎缩性侧索硬化、关岛型肌萎缩性侧索硬化/帕金森症-痴呆复合症(als-pdc)、皮质基底核变性、慢性创伤性脑病、克雅病、拳击手型痴呆、弥漫性神经原纤维缠结伴钙化症、唐氏综合征、家族性英国型痴呆、家族性丹麦型痴呆、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克病、全脑胶质细胞tau蛋白病、瓜德罗普帕金森症伴痴呆、瓜德罗普psp、哈勒沃登-施帕茨病、遗传性弥漫性白质脑病合并轴索球样变(hdls)、亨廷顿病、包涵体肌炎、多系统萎缩、强直性肌营养不良、那须-哈库拉病、神经原纤维缠结优势型痴呆、c型尼曼-匹克病、苍白球-脑桥-黑质变性、帕金森病、皮克病、脑炎后帕金森症、朊蛋白脑淀粉样血管病、进行性皮质下神经胶质瘤病、亚急性硬化性全脑炎和仅缠结型痴呆。

69.如权利要求68所述的方法，其中所述神经退行性疾病为阿尔茨海默病。

70.一种用于确定分子是否对pilra蛋白具有活性的方法，所述方法包括：

71.如权利要求70所述的方法，其中步骤(a)的所述细胞天然表达所述pilra蛋白。

72.如权利要求70或71所述的方法，其中具有较低pilra表达的所述细胞已敲除所述pilra蛋白。

73.如权利要求72所述的方法，其中所述细胞为小胶质细胞。

74.如权利要求73所述的方法，其中所述细胞为imicroglia。

75.如权利要求74所述的方法，其中所述细胞为pilra lof imicroglia。

76.如权利要求70所述的方法，其中步骤(a)的所述细胞经工程化或修饰以表达或过表达所述pilra蛋白。

77.如权利要求76所述的方法，其中具有较低pilra表达的所述细胞天然表达所述pilra蛋白，或者未经工程化或修饰以表达所述pilra蛋白。

78.如权利要求70至77中任一项所述的方法，其中所述分子来自分子文库。

79.如权利要求70至78中任一项所述的方法，其中已知所述分子结合所述pilra蛋白。

80.如权利要求70至78中任一项所述的方法，其中不知晓所述分子是否结合所述pilra蛋白。

81.如权利要求70至80中任一项所述的方法，其中所述分子为抗体、肽、有机小分子或核酸。

82.一种用于确定结合pilra蛋白的分子是否调节pilra表达细胞中的信号传导反应或活性的方法，所述方法包括：

83.如权利要求82所述的方法，其中所述变化为当所述分子接触所述细胞时，相对于没有所述分子的情形下所述细胞中的水平，所述测量值中的一者的水平增加或减少。

84.如权利要求82或83所述的方法，其中所述细胞是在体外测定中。

85.如权利要求82或83所述的方法，其中所述细胞是在哺乳动物中。

86.如权利要求85所述的方法，其中步骤(a)包括向所述哺乳动物施用所述分子。

87.如权利要求82至86中任一项所述的方法，其中所述细胞为小胶质细胞、髓样细胞、单核细胞或中性粒细胞。

88.一种工程化的人类诱导型多能干细胞(ipsc)或ipsc细胞系，其中所述ipsc已经修饰以表达编码pilra蛋白的r78变体或g78变体的基因的两个拷贝。

89.如权利要求88所述的工程化的人类ipsc或ipsc细胞系，其中所述ipsc是在内源性基因组位点处经修饰。

90.一种源自人类诱导型多能干细胞(ipsc)的工程化小胶质细胞模型，其中所述ipsc已经修饰以表达编码pilra蛋白的r78变体或g78变体的基因的两个拷贝。

91.如权利要求90所述的工程化小胶质细胞模型，其中所述ipsc是在内源性基因组位点处经修饰。

92.一种匹配的细胞系对，其中：

93.如权利要求92所述的匹配的细胞系对，其中所述亲代细胞系对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体的所述基因为纯合的。

94.如权利要求92所述的匹配的细胞系对，其中所述亲代细胞系对于编码所述pilra蛋白的所述g78变体的所述基因为纯合的。

95.如权利要求92所述的匹配的细胞系对，其中所述亲代细胞系对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体和所述g78变体的基因为杂合的。

96.如权利要求92至95中任一项所述的匹配的细胞系对，所述细胞系对还包含对于编码所述pilra蛋白的所述g78变体和所述r78变体的所述基因为杂合的第三细胞系。

97.如权利要求96所述的匹配的细胞系对，其中所述第三细胞系源自对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体或所述g78变体的所述基因为纯合的所述亲代细胞系。

98.一种产生具有经修饰的pilra基因的髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的干细胞系的方法，所述方法包括：

99.一种产生匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：

100.如权利要求99所述的方法，其中所述工程化细胞系在经工程化之前对于编码所选变体的所述基因不为纯合的。

101.如权利要求98至100中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述现有细胞系对于所述pilra蛋白的所述r78变体为纯合的，并且步骤(b)的所述工程化包括修饰所述现有细胞系，以产生对于编码所述pilra蛋白的所述g78变体的所述基因为纯合的工程化细胞系。

102.如权利要求98至100中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述现有细胞系对于所述pilra蛋白的所述g78变体为纯合的，并且步骤(b)的所述工程化包括修饰所述现有细胞系，以产生对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体的所述基因为纯合的工程化细胞系。

103.如权利要求98至100中任一项所述的方法，其中步骤(a)的所述现有细胞系对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体和所述g78变体的所述基因为杂合的，并且步骤(b)的所述工程化包括修饰所述现有细胞系，以产生对于编码所述pilra蛋白的所述r78变体的所述基因为纯合的工程化细胞系和对于编码所述pilra蛋白的所述g78变体的所述基因为纯合的工程化细胞系。

104.如权利要求98至103中任一项所述的方法，其中所述髓样细胞系为ipsc系。

105.一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系产生对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因为杂合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：

106.一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系产生对于编码pilra蛋白的r78和g78变体的基因为杂合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：

107.一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系产生对于编码pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：对所述现有细胞系进行工程化，以产生对于编码所述pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

108.一种从现有髓样细胞系或能够分化成髓样细胞系的现有干细胞系产生对于编码pilra蛋白的g78变体的基因为纯合的匹配的细胞系对的方法，所述方法包括：对所述现有细胞系进行工程化，以产生对于编码所述pilra蛋白的r78变体的基因为纯合的工程化细胞系。

109.如权利要求105至108中任一项所述的方法，其中所述髓样细胞系为ipsc系。