抗猴IFN-γ的抗体及其在结核诊断中的应用的制作方法

本发明涉及免疫学，具体地，涉及抗猴ifn-γ的抗体及其在结核诊断中的应用。

背景技术：

1、结核病是主要由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis)和牛分枝杆菌(mycobacterium bovis)等引起的人和多种动物共患的慢性消耗性传染病，猴等非人灵长类动物最常感染结核分枝杆菌。猴结核的危害主要体现在3个方面：猴群本身的健康损失和生态学影响；作为实验动物导致科学研究失败；猴结核在人与猴间传播威胁人类健康。我国是结核病高发国家，由于猴可在多种场合与不同人接触，因此，猴结核无疑是人结核的传染源之一，具有重要的公共卫生学意义。

2、猴结核检疫是国内贸易和进出口贸易的必检项目之一，目前法定的猴结核检疫方法为眼睑结核菌素皮内变态反应法(tst)，简称皮试。然而，该方法存在明显缺陷，如需要多次检测和观察，与卡介苗(bcg)和环境分枝杆菌间具有交叉反应，活动性肺结核患者可能无皮试反应，不能进行高通量检测等。细菌学检测被誉为结核病诊断的金标，主要为涂片镜检和微生物培养，但由于实验猴几乎没有痰液，涂片镜检几乎无效，而微生物培养由于检测周期长，不利于及时隔离阳性猴而可能导致群体感染。病理组织学诊断虽然准确性高，但由于要进行组织采样，多用于阳性猴处死后的确诊。分子生物学的诊断方法也被应用于猴的结核病检测中，并且敏感性较高，但受到猴场实验条件和经费的限制，目前不适于猴群的结核病普检。

3、免疫学诊断技术具有简单、快速、价廉等特点，一直是结核病检测的重要诊断方法。由于机体感染结核分枝杆菌后体内会存在致敏的t淋巴细胞，当再次接触相同的结核分枝杆菌时，致敏的淋巴细胞就活化为效应性淋巴细胞，释放ifn-γ等细胞因子，因而采集新鲜全血后，人为给予二次刺激，即可通过检测ifn-γ而知道是否有结核感染。中国发明专利cn103361317a公开了一种猕猴ifn-γ的单克隆抗体杂交瘤细胞及制备方法和应用，其构建的间接双夹心elisa方法的检测猴ifn-γ的灵敏度为125pg/ml，而对于通过ifn-γ释放实验来检测结核感染，需要灵敏度进一步提升。因此，开发高亲和力的猴ifn-γ抗体，继而开发灵敏度更高的检测猴ifn-γ的方法及试剂盒具有重要的意义。

技术实现思路

1、为克服现有技术中存在的上述缺陷与不足，本发明提供抗猴ifn-γ的抗体及其在结核诊断中的应用。

2、本发明的第一个目的是提供一种抗猴ifn-γ的单克隆抗体83a8。

3、本发明的第二个目的是提供一种抗猴ifn-γ的单克隆单体60d9。

4、本发明的第三个目的是提供生物材料。

5、本发明的第四个目的是提供一种抗猴ifn-γ的抗体组合物。

6、本发明的第五个目的是提供上述的单克隆抗体83a8、生物材料、单克隆抗体60d9、生物材料和/或抗体组合物在制备猴ifn-γ的检测产品中的应用。

7、本发明的第六个目的是提供一种用于检测猴ifn-γ的双抗夹心elisa试剂盒。

8、因此，本发明要求保护以下内容：

9、一种抗猴ifn-γ的单克隆抗体83a8，所述单克隆抗体83a8包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no：2所示，所述重链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq id no：3所示，所述重链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no：4所示；

10、所述轻链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no：6所示，所述轻链可变区的cdr2的氨基酸序列为kvs，所述轻链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no：7所示。

11、优选地，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：1所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：5所示。

12、生物材料，所述生物材料为以下任意一种：

13、编码含有氨基酸序列如seq id no：1所示的重链可变区和氨基酸序列如seq idno：5所示的轻链可变区的蛋白的核酸分子，或编码含有seq id no：1所示的完全互补氨基酸序列的重链可变区和seq id no：5所示的完全互补氨基酸序列的轻链可变区的蛋白的核酸分子；

14、含有上述核酸分子的表达盒；

15、含有上述核酸分子的重组载体；

16、含有上述核酸分子的重组微生物；

17、含有上述核酸分子的细胞系。

18、一种抗猴ifn-γ的单克隆抗体60d9，所述单克隆抗体60d9包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no：9所示，所述重链可变区的cdr2的氨基酸序列如seq id no：10所示，所述重链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no：11所示；

19、所述轻链可变区的cdr1的氨基酸序列如seq id no：13所示，所述轻链可变区的cdr2的氨基酸序列为kvs，所述轻链可变区的cdr3的氨基酸序列如seq id no：14所示。

20、优选地，所述重链可变区的氨基酸序列如seq id no：8所示，所述轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：12所示。

21、生物材料，所述生物材料为以下任意一种：

22、编码含有氨基酸序列如seq id no：8所示的重链可变区和氨基酸序列如seq idno：12所示的轻链可变区的蛋白的核酸分子，或编码含有seq id no：8所示的完全互补氨基酸序列的重链可变区和seq id no：12所示的完全互补氨基酸序列的轻链可变区的蛋白的核酸分子；

23、含有上述核酸分子的表达盒；

24、含有上述核酸分子的重组载体；

25、含有上述核酸分子的重组微生物；

26、含有上述核酸分子的细胞系。

27、一种抗猴ifn-γ的抗体组合物，包括上述的单克隆抗体83a8和单克隆抗体60d9。

28、上述的单克隆抗体83a8、单克隆抗体60d9、生物材料和/或抗体组合物在制备猴ifn-γ的检测产品中的应用。

29、优选地，所述检测产品包含试剂、试纸条和试剂盒中的一种或几种。

30、一种用于检测猴ifn-γ的双抗夹心elisa试剂盒，包含上述的单克隆抗体83a8和/或单克隆抗体60d9，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。

31、优选地，所述单克隆抗体83a8为捕获抗体，所述单克隆抗体60d9为检测抗体。

32、更优选地，所述试剂盒中还包含封闭剂、显色液、抗体稀释液、洗液和终止液中的一种或几种。

33、一种检测猴ifn-γ的免疫分析方法，用上述的抗体组合物进行检测，所述单克隆抗体83a8为捕获抗体，所述单克隆抗体60d9为检测抗体，所述检测以非疾病治疗诊断为目的。

34、上述的单克隆抗体83a8、单克隆抗体60d9、生物材料、抗体组合物和/或双抗夹心elisa试剂盒在猴结核诊断中的应用。

35、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

36、本发明公开了抗猴ifn-γ的抗体及其在结核诊断中的应用，所述抗猴ifn-γ的抗体包括83a8和60d9抗体。本发明制备的抗猴ifn-γ抗体具有特异性强、灵敏度高等特点，由83a8和60d9抗体构建的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测猴ifn-γ的灵敏度为19.232pg/ml，在结核病检测以及猴结核检疫中具有广泛的应用前景。